[发明专利]一种高纯度棘白菌素B母核或其盐纯化方法在审
申请号: | 201710378690.8 | 申请日: | 2017-05-25 |
公开(公告)号: | CN107759668A | 公开(公告)日: | 2018-03-06 |
发明(设计)人: | 袁建栋;黄仰青;顾家宁;孙占莉 | 申请(专利权)人: | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 |
主分类号: | C07K7/56 | 分类号: | C07K7/56;C07K1/16 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 纯度 菌素 纯化 方法 | ||
1.一种高纯度棘白菌素B母核或其盐的纯化方法,包括以下步骤:
将棘白菌素B母核或其盐的粗品溶解,作为样品,将样品上样至高效液相制备色谱柱;然后采用水溶液和有机溶剂的混合液作为流动相,进行洗脱;分段收集洗脱液;其中,所述高效液相制备色谱柱的填料为Daisogel SP-100-8-C8-HP,Daisogel SP-100-8-ODS-P,和纳微PS 30-300或纳微PS40-300;所述水溶液为0~2.0%(w/v)醋酸水溶液,纯化水,0~2.0%(w/v)TFA水溶液,或0~2.0%(w/v)的磷酸水溶液,所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或异丙醇。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,在样品上样至高效液相制备色谱柱前,先对高效液相制备色谱柱用90%~100%的有机溶剂预洗,然后再用含0%-10%的有机溶剂的流动相平衡制备色谱柱。
3.根据权利要求2所述方法,其特征在于,将溶解的棘白菌素B母核粗品样品上样至平衡的制备色谱柱,用有机相含0%-30%有机溶剂的流动相冲洗3-10个柱体积洗脱主峰,最后用含80%有机溶剂的流动相冲洗冲洗1-3个柱体积。
4.根据权利要求3所述方法,其特征在于,将棘白菌素B母核粗品用5~20倍重量体积的水溶解,作为样品。
5.根据权利要求4所述方法,其特征在于,所述用于平衡制备色谱柱的含0%-10%的有机溶剂的流动相为1%~5%甲醇与0~2.0%醋酸的混合液,1%~5%甲醇与0~2.0%TFA的混合液或1%~5%甲醇与0~2.0%磷酸水溶液的混合液。
6.根据权利要求5所述方法,其特征在于,所述有机相含0%-30%有机溶剂的流动相为0%~20%甲醇与0~2.0%醋酸混合液、0%~20%甲醇与0~2.0%TFA混合液或0%~20%甲醇与0~2.0%磷酸水溶液的混合溶液构成的流动相体系。
7.根据权利要求1所述方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将棘白菌素B母核或其盐的粗品用10~20倍重量体积的水溶解,作为样品;
(2)对高效液相制备色谱柱用90%~100%的有机溶剂预洗除去杂质,然后再用0%-10%(v/v)甲醇水溶液冲洗1-3个柱体积平衡制备色谱柱;
(3)将步骤(1)中的样品上样至步骤(2)的高效液相制备色谱柱;
(4)采用0%-30%(v/v)的甲醇水溶液冲洗3-6个柱体积洗脱主峰,最后用80%(v/v)的甲醇水溶液冲洗1-3个柱体积洗脱后杂,分段收集洗脱液;其中,所述水溶液为0~2.0%(w/v)醋酸水溶液,纯化水,0~2.0%(w/v)TFA水溶液,或0~2.0%(w/v)的磷酸水溶液;所述高效液相制备色谱柱填料为Daisogel SP-100-8-ODS-P。
8.根据权利要求1~7任一所述方法,其特征在于,所述棘白菌素B母核或其盐的粗品含量为50%~95%。
9.根据权利要求1~7任一项所述方法,其特征在于,所述棘白菌素B母核或其盐的粗品是通过以下方法制备得到:
(1)将棘白菌素B母核的转化液酸化,调节pH至4.0~5.0,压滤,然后用去离子水顶洗,收集滤液;
(2)将收集的滤液进行超滤、纳滤,浓缩至浓度≥3000mg/kg;
(3)将步骤(2)的浓缩液通过大孔树脂进行纯化,解析液为甲醇或乙腈的水溶液,收集解析液;浓缩,得到棘白菌素B母核或其盐的粗品。
10.根据权利要求9所述方法,其特征在于,所述大孔吸附树脂为LX-18,LX-700、D290、XDA-7、D301或HZ801树脂中的任意一种,所述解析液为pH2.0~4.0的酸水溶液和5~20%(v/v)的甲醇或乙腈的混合液,任选的将所述大孔吸附树脂在上样前用pH为3.5~5.0的酸水溶液进行预洗。
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