[发明专利]一种固液结合制备地加瑞克的方法

说明书

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种采用固液结合的化学方法制备地加瑞克的方法，本发明首次合成片段肽Ac‑D‑2Nal‑D‑4Cpa‑D‑3Pal‑Ser(tBu)‑4Aph(Fmoc)‑OH用于地加瑞克的固相合成，合成过程简单，所用原料便宜易得，易于放大生产；本发明避免使用剧毒试剂HF，采用TFA组合裂解后，经纯化、冻干得到纯度99.5％的精肽，且总收率达到65％。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液结合制备地加瑞克的方法。

技术背景

地加瑞克(Degarelix)由Ferring Pharmaceuticals开发，于2008年12月24日在美国上市，商品名Firmagon,用于治疗晚期前列腺癌；地加瑞克是一种促性腺激素释放激素(GnRH)受体抑制剂类药物，可逆性抑制垂体GnRH受体来减少促性腺激素释放继而抑制睾酮的释放，其通过抑制对前列腺癌持续生长至关重要的睾酮来延缓前列腺癌的生长和恶化；其可以避免以激素治疗前列腺癌来降低睾酮浓度的初期却造成睾酮浓度激增的弊端，由此可以避免初始刺激该激素受体可暂时性促进肿瘤生长而不是抑制它，临床研究显示，其疗效显著，临床应用前景广阔。

地加瑞克为含有七个非天然氨基酸的线性十肽，分子量为1630.75，其氨基酸序列为Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH₂，其中Ac为乙酰基(acetyl)，2Nal为2-萘基丙氨酸(2-naphthylalanine)，4Cpa为4-氯苯丙氨酸(4-chlorophenylalanine)，3PaI为3-吡啶基丙氨酸(3-pyridylalanine)，4Aph为4-氨基苯丙氨酸(4-aminophenylalanine)，Hor为氢化乳清酸，Cbm为氨基甲酰(carbamoyl)，Lys(iPr)为N6-异丙基赖氨酸(N6-isopropyllysine)；其结构式如下：

国内外报道了Boc和Fmoc两种化学合成地加瑞克的方法，在Boc方法中，专利US5925730中公开了采用Boc化学固相合成方法，首先制备得到地加瑞克；其中6位4Aph(Cbm)采用Boc-4Aph(Fmoc)-OH为合成原料接入肽序中，偶联后，脱掉Fmoc,用叔丁基异氰酸酯与侧链氨基反应，得到酰胺被叔丁基保护4Aph(Cbm)，叔丁基在随后的TFA脱Boc过程中一起被脱掉；其中5位4Aph(Hor)也是采用Boc-4Aph(Fmoc)-OH为合成原料接入肽序中，脱掉Fmoc后,与L-氢化乳清酸发生偶联反应，得到4Aph(L-Hor)；专利US5977302中公开了采用Boc化学液相合成方法，经由“4-2-4”、“3-3-4”或“3-4-3”液相合成策略完成地加瑞克的合成；以上合成方法需要用到剧毒HF作为裂解试剂，所以大批量生产受到限制；而专利US9090656同样也采用Boc化学法液相片段策略“3-4-3”制得地加瑞克，其采用了不同于专利US5925730和US5977302的侧链保护策略，有效的避免了HF的使用，但是合成过程中多次使用到钯碳脱保护基，不仅操作繁琐，成本较高，而且容易造成重金属超标等不利因素。

在地加瑞克结构中自N端起第五位为非天然氨基酸4Aph(L-Hor)，其结构为(L-氢化乳清酸)-4-氨基-苯丙氨酸，在碱性条件下，结构中二氢尿嘧啶会发生重排而成为乙内酰脲(Koedjikov,A.H.et.al.,J.Chem.Soc.Perkin,Trans.2,1984,pages 1077-1081；Kaneti,J.et.al.,Org.Biomol.Chem.,2004,pages 1098-1103)，重排示意图如下：