[发明专利]一种测定前白蛋白的试剂及其测定前白蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种测定人前白蛋白的检测试剂。

技术背景

血清前白蛋白(PA)，由肝细胞合成，是由4个相同亚基组成的四聚体，分子量55.0kD，具有重要的生理活性。可视作一种转载蛋白，与甲状腺素结合球蛋白(TBG)和白蛋白(ALB) 一起，协同参与甲状腺素的转运。与视黄醇结合蛋白(RBP)形成复合物，具有运载维生素A 的作用。

PA在甲状腺激素运输中的作用仅次于TBG。TBG负责转运甲状腺素总量的70％～75％， PA转运15％～20％，而ALB转运的甲状腺素更少些(10％)。在正常生理条件下，血浆甲状腺素几乎全部(99.98％)通过与这三种蛋白质结合运转，到达靶细胞。

PA的另一重要功能是协助RBP转运视黄醇。当机体需要维生素A时，贮存在肝脏内的视黄醇酯被水解，游离的视黄醇与RBP结合，被分泌到血循环中，再与PA结合，所形成的视黄醇RBP-PA大分子结合物，通过循环转运到有特异性RBP受体结合部位的靶组织中，一进入靶细胞，视黄醇-RBP-PA结合物即分离。

PA分子量小，半衰期短，相较ALB具有更高的敏感性，升高和降低更为明显，可作为早期肝功能损伤的指标。PA的检测同时可用于判断患者的营养状况，也可作为实体瘤患者化疗后肝功能损害的预见性指标。

PA的测定方法由很多，包括：放射免疫分析法、免疫电泳法、免疫扩散法等。这些方法均不同程度存在操作法繁琐、原料种类多、消耗量大等问题，不适于大规模生产。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：如何提供一种操作简单，适合大规模使用的测定前白蛋白的试剂及其测定前白蛋白的方法。

本发明所采用的技术方案是：一种测定前白蛋白的试剂，包括第一试剂和第二试剂；第一试剂中NaH₂PO₄含量为20～30mmol/L，PEG-6000含量为30～50g/L，Tween-80含量为0.5～ 1ml/L，NaN₃含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，其它物质为水；第二试剂中NaH₂PO₄含量为20～30mmol/L，EDTA·Na₂含量为0.8～1.2g/L，NaN₃含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，前白蛋白抗血清质量百分比浓度为18～20％，其它物质为水。

一种所述的测定前白蛋白的试剂测定前白蛋白的方法，按照如下的步骤进行

步骤一、测定第一试剂的吸光度为A_1空白，将第一试剂和血清样本按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A_1样本，将第一试剂和已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A_1校准；

步骤二、测定第二试剂的吸光度为A_2空白，将第一试剂、第二试剂、血清样本按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A_2样本，将第一试剂、第二试剂、已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A_2校准；

步骤三、血清样本中前白蛋白含量为ΔA₀/ΔA_s*C_s，其中：以空白管吸光度为对照的样本管吸光度ΔA₀＝(A_2样本-A_1样本)-(A_2空白-A_1空白)，以空白管吸光度为对照的校准品吸光度ΔA_s＝(A_2校准 -A_1校准)-(A_2空白-A_1空白)，C_s：校准品中前白蛋白的浓度。

作为一种优选方式：所有吸光度的测量都使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为340nm，副波长为700nm。

本发明的有益效果是：本发明试剂可直接应用于全自动生化分析仪进行测定，具有原料种类少、消耗量少、试剂空白值低、准确度高、灵敏度好、操作简便等特点。

具体实施方式