[发明专利]一种羊多抗血清特异性抗体的纯化方法

权利要求书

1.一种羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）盐析法：用辛酸、硫酸铵三步沉淀法，将羊多抗血清中的特异性抗体全部提取；

2）蛋白G柱纯化：取盐析后的羊多抗血清特异性抗体，用结合缓冲液稀释，过滤，加入G柱中，收集流穿液，用结合缓冲液加入G柱中，待全部流出，加洗脱缓冲液，同时收集洗脱液；即得到纯化后的羊多抗血清特异性抗体。

2.根据权利要求1 所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤1）盐析法的具体步骤如下；

（11）羊多抗血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，用0.1M NaOH 调至pH4.5；

（12）室温下滴加辛酸，搅拌30min，按每升溶液滴加25mL辛酸的比例滴加；

（13）冷冻高速离心机离心，收集上清夜，弃去沉淀；

（14）过滤上清液；

（15）按上清液体积的l/10加入10×PBS，用5M NaOH 调至pH7.4；

（16）按每升溶液加277g 硫酸铵，搅拌30min；

（17）冷冻高速离心机离心，弃去上清液，收集沉淀；

（18）沉淀用透析液溶解，透析脱盐。

3.根据权利要求2所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤（13）中的离心转速为10000rpm，离心30min。

4.根据权利要求1 所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤（17）中的离心转速为5000rpm，离心15min。

5.根据权利要求1 所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤2）中，蛋白G柱纯化法的步骤为：

（21）血清处理：取羊多抗血清，用结合缓冲液 1:1稀释，充分混匀，滤膜过滤；

（22）柱子平衡：用结合缓冲液加入柱中，流至液面与胶面平；

（23）吸附：处理好的抗血清加入柱中，收集流穿液；

（24）洗杂：用结合缓冲液加入柱中，待全部流出；

（25）洗脱抗体：加洗脱缓冲液 ，同时用离心管收集洗脱液，前1.5ml丢弃，收集后续全部洗脱液。

6.根据权利要求1 或5所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤2）中，结合缓冲液为： 10mMPBS含NaN₃ 0.01% ，pH7.2—7.4。

7.根据权利要求1或5所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，洗脱缓冲液为：10 mM NaH₂PO₄ ，150mM NaCl 含NaN₃ 0.01% （重量百分比），用盐酸调至pH 2.8±0.04，其中所用盐酸为 5M HCl。

8.根据权利要求1 或5所述的羊多抗血清特异性抗体的纯化方法，其特征在于，步骤2）中，过滤采用0.22nm的滤膜过滤。