[发明专利]一种日本扁柏初代培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种日本扁柏初代培养方法，属于树木无性繁殖技术领域。

背景技术

日本扁柏(Chamaecyparis obtusa)为柏科扁柏属植物，主要种植区分布在日本，台湾分布的扁柏为变种，由人工引种栽培。

日本扁柏是一种叶端金黄、四季观赏的植物，用有性繁殖进行播种，会使品种的特征退化，而扦插繁殖虽然能够进行，但繁殖系数仍很低。一旦日本扁柏的组培技术获得重大突破，则可进行大规模育苗，一方面可以作为商业生产手段，另一方面也能成为保护珍稀物种的重要生物技术。目前国内针对日本扁柏的组织培养技术还没有进行相应研究，因此一种针对日本扁柏组织培养技术的研究很有意义，有助于日本扁柏能在园林绿化中尽快大面积广泛应用。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种日本扁柏初代培养方法，该方法通过利用不同种类并含有不同浓度生长激素的初代培养基对日本扁柏外植体进行组织培养，最终得到日本扁柏外植体的最优培养基类型以及最佳激素浓度。

发明内容：为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：

一种日本扁柏初代培养方法，包括如下步骤：

步骤1，选取一株健康生长的植株作为母本，从母本植株上剪下当年生的茎尖；

步骤2，将步骤1得到的茎段分别进行洗涤、消毒处理，再用浓度为1～1.5g/L的升汞浸泡3～5min，浸泡后冲洗干净；

步骤3，剪去与升汞接触过的创面，将外植体分别接种到不同种类的初代培养基中；

步骤4，初代培养中，培养室的培养温度为23～27℃，光照强度为1600～1700Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d；

步骤5，观察不同种类初代培养基搭配不同浓度生长激素对外植体分枝数和生长量的影响，从而得到最优培养基类型以及最佳激素浓度。

其中，步骤1中，所述茎尖为成熟日本扁柏一年生茎尖，利用植物的嫩茎进行组培，可避免伤害植株。

其中，步骤2的具体操作方式为：先用一定浓度的肥皂水对步骤1的茎尖进行洗涤，洗涤干净后再用流动自来水冲洗4h以上；接着在超净工作台上用浓度为75～80％的酒精消毒30～40s，消毒后用无菌水反复冲洗3遍；最后用浓度为1～1.5g/L的升汞浸泡3～5min，浸泡后用无菌水冲洗3遍。在用升汞以及酒精对茎段进行消毒时，消毒时间在一定程度上影响了外植体的成活率。

其中，步骤3中，初代培养基的种类有1/2MS培养基、MS培养基和WPM培养基，优选WPM培养基。

其中，初代培养基中含有的生长激素为6-BA和NAA。

其中，初代培养基中生长激素6-BA的浓度为0～1mg/L，优选0.5mg/L，初代培养基中生长激素NAA的浓度为0.05～0.45mg/L，优选0.05mg/L。

其中，本发明组织培养方法还需要将日本扁柏组培苗独立放置或远离其他物种的组培苗，降低其真菌感染的几率。

相比于现有技术，本发明技术方案具有的有益效果为：

本发明组织培养方法通过利用不同种类并含有不同浓度生长激素的初代培养基对日本扁柏外植体进行组织培养，最终得到日本扁柏外植体的最优培养基类型以及最佳激素浓度；另外，本发明组织培养方法能够解决日本扁柏组织培养中生长速度慢、不易形成愈伤组织的问题；本发明组织培养方法可以大规模繁殖日本扁柏，以供给市场，有助于日本扁柏能在园林绿化中尽快大面积广泛应用。

附图说明

图1为不同种类培养基对外植体分枝数和生长量的影响。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

1实验材料与方法

1.1材料的选择

选择具有最大分化潜能的外植体是确保组织培养成功的关键。本实施例选用采自江苏省句容市郊外试验地的成熟日本扁柏一年生茎尖。

1.2方法

1.2.1材料处理