[发明专利]一种前白蛋白多抗血清的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种前白蛋白多抗血清的制备方法及其应用。

背景技术

血清前白蛋白(PA)又称转甲状腺素蛋白，是由4个相同亚基组成的四聚体，分子量为55.0kD。由肝细胞合成，除作为组织修补的材料外，还可视作一种转载蛋白，PA与视黄醇结合蛋白形成复合物，具有运载维生素A的作用。PA与甲状腺素结合球蛋白(TBG)和白蛋白(ALB)一起，协同参与甲状腺素的转运。

PA在甲状腺激素运输中的作用仅次于TBG。TBG负责转运甲状腺素总量的70％～75％，PA则转运15％～20％，而ALB转运的甲状腺素更少些(10％)。在正常生理条件下，血浆甲状腺素几乎全部(99.98％)通过与这三种蛋白质结合运转，到达靶细胞。

PA的另一重要功能是协助视黄醇结合蛋白(RBP)转运视黄醇。当机体需要维生素A时，贮存在肝脏内的视黄醇酯被水解，游离的视黄醇与RBP结合，被分泌到血循环中，再与PA结合，所形成的视黄醇RBP-PA大分子结合物，通过循环转运到有特异性RBP受体结合部位的靶组织中，一进入靶细胞，视黄醇-RBP-PA结合物即分离。

血清中PA的测定结果在临床上是反应肝功能和机体营养状态的重要指标，常见于营养不良者。由于PA半衰期很短，可以反应肝脏合成和分解代谢的轻微改变，其血清浓度降低的幅度与肝实质损害的程度密切相关，因此在临床上也常见于肝功能损伤、肝硬化、外伤及感染患者。急性、亚急性重症肝炎起病后一周内，PA的下降变化远较ALB敏感。各型肝炎患者血清PA水平均有不同程度的降低，以肝硬化和重症肝炎降低最显著。因此，血清中的PA可作为中毒肝病的早期诊断指标和观察肝脏功能恢复的灵敏指标。

鉴于前白蛋白在疾病诊断中的应用，作为前白蛋白检测试剂核心原料的前白蛋白多抗血清的制备具有显著的应用价值。常规的硫酸铵和氯化钙沉淀法存在杂蛋白去除不完全、血清损耗率高等问题。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术存在的缺点与不足，提供一种前白蛋白多抗血清的制备方法及其应用。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种前白蛋白多抗血清的制备方法，其中，包括以下步骤：

1)采血：使用无菌采血法采集羊全血至血袋内备用；

2)分离：将步骤1)采集的羊全血置于高速冷冻离心机中，在温度为4℃的条件下，采用3000～5000rpm的转速，离心10min，待离心结束后取上清液备用；

3)沉淀：在步骤2)处理好的上清液中按照体积比为上清液：1％氨水的饱和硫酸铵溶液：生理盐水＝3:5:2的比例加入含1％氨水的饱和硫酸铵溶液和生理盐水，置于磁力搅拌器上搅拌2～3小时，制得混合溶液；

4)离心：将步骤3)制得的混合溶液置于高速冷冻离心机中，在温度为4℃的条件下，采用8000～1000rpm的转速，离心10min，弃上清，沉淀物备用；

5)复溶：将步骤4)制得的沉淀物中再按照体积比为沉淀物：1％氨水的饱和硫酸铵溶液：生理盐水＝3:5:2的比例加入含1％氨水的饱和硫酸铵溶液和生理盐水，置于磁力搅拌器上搅拌2～3小时，制得混合溶液；

6)重离心：将步骤5)制得的混合溶液再置于高速冷冻离心机中，在温度为4℃的条件下，采用8000～1000rpm的转速，离心10min，弃上清，沉淀物备用；

7)再在步骤6)制得的沉淀物中加入体积比为沉淀物：生理盐水＝3:2的生理盐水，置于磁力搅拌器上搅拌10～15分钟，将混合液装入透析袋，在生理盐水环境中透析72h～96h，每24h更换一次生理盐水，透析结束后得透析液；

8)将步骤7)制得的透析液倒出，置于高速冷冻离心机中，在温度为4℃的条件下，采用8000～1000rpm的转速，离心10min，弃沉淀，在上清中加体积分数为4％的PEG-6000，制得前白蛋白多抗血清。

本发明一种前白蛋白多抗血清，应用于制备前白蛋白检测试剂。

与现有技术相比，本发明提供的从免疫的羊血浆中制备前白蛋白多抗血清的制备方法，具有如下优点及效果：

1.在饱和硫酸铵溶液中添加氨水，使得溶液处于稳定的饱和状态，保证盐析的进行；

2.利用蛋白质的盐析特性，两次沉淀纯化，减少了血浆中的杂蛋白；

3.根据聚乙二醇可作为分散剂和促溶剂的性质，保证了血清的稳定状态。采用简便操作方法，实现了血清除杂，该方法不但操作简单，而且血清损耗少，获得的血清可以直接用于诊断试剂生产。

具体实施方式

实施例1