[发明专利]粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺

说明书

本发明涉及一种粪肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺，发酵培养基组分及其含量如下：甘油20～30g/L、豆粕10～15g/L、硫酸铵1～3g/L、三水合磷酸氢二钾2～3g/L、三水合乙酸钠3～8g/L、二水合柠檬酸钠2～4g/L、七水合硫酸镁0.3～0.8g/L、一水合硫酸锰0.1～0.3g/L。发酵工艺:采用高溶氧(25％)并结合甘油为碳源发酵,以碳酸钠恒定发酵液pH值5.5，并在发酵过程中流加补料控制甘油浓度在10g/L,培养16小时后OD(600nm)大于35标志发酵结束，发酵液含粪肠球菌活菌数可达8×10¹⁰CFU/mL以上。本发明采用高溶氧结合甘油为碳源的发酵方式降低了发酵液中的乳酸浓度，发酵液含粪肠球菌可以达到8×10¹⁰CFU/mL以上，减小生物量的分离费用，缩短生产周期，降低生产成本、提高生产效率。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺，适用于粪肠球菌的高密度发酵生产。

背景技术

《饲料添加剂品种目录(2013)》将粪肠球菌规定为可以添加到饲料中的菌种，其在动物肠道内可形成生物薄膜附着于动物肠道粘膜上，并且发育、生长和繁殖。粪肠球菌属于人及动物肠道中的正常菌群，进入肠道后可有效定殖。粪肠球菌发酵产生乳酸，有利于降低肠道环境pH，抑制有害菌的生长。粪肠球菌代谢过程中还会产生过氧化氢，细菌素等物质，对致病菌有一定的杀灭作用，而且能产生天然抗生素，有利于机体健康，目前在养殖业中应用比较广泛，但传统的粪肠球菌发酵多选用MRS培养基，价格昂贵，发酵后的活菌数低，在益生菌有效使用剂量固定的情况下，低发酵水平等于变相的增加了成本。低成本的培养基，高效的可放大的发酵工艺对于推进益生菌发酵的产业化有重大指导及实践意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种比现有技术更加能有效发酵粪肠球菌获得高菌体生物量的粪肠球菌高密度发酵培养基。

本发明的另一目的在于提供了一种采用上述粪肠球菌高密度发酵培养基，并在粪肠球菌发酵期间合理添加补料，从而能比现有技术获得更高生物量的粪肠球菌高密度发酵工艺。

本发明的第三个目的在于提供上述粪肠球菌高密度发酵工艺在粪肠球菌发酵生产中的应用。

本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)高密度发酵培养基，该粪肠球菌高密度发酵的种子和发酵培养基为液体培养基，其组分及其含量如下：甘油20～30g/L、豆粕10～15g/L、硫酸铵1～3g/L、三水合磷酸氢二钾2～3g/L、三水合乙酸钠3～8g/L、二水合柠檬酸钠2～4g/L、七水合硫酸镁0.3～0.8g/L、一水合硫酸锰0.1～0.3g/L。

本发明还提供了该粪肠球菌高密度发酵培养基的发酵工艺，主要步骤如下：

(1)将冷冻保存的粪肠球菌甘油菌种划线于MRS琼脂培养基上，放置32～39℃培养箱中培养至长出单菌落；上述单菌落中挑取饱满的单菌落接种于MRS液体试管，32～39℃，50～200r/min摇瓶培养10小时后；以1％接种量转接于MRS液体培养基，培养8～10小时后作为种子液；

(2)配制粪肠球菌高密度发酵培养基，培养基降至所需温度时，接上溶氧电极，标定溶氧为100％；

(3)以2％～8％的接种量将步骤(1)所得的种子液接种于步骤(2)的发酵培养基中；