[发明专利]检测FBXW7基因突变的方法、寡核苷酸及其应用

说明书

背景技术

恶性肿瘤的发病是由多种外源性致癌物诱导和内源性基因表达失控共同作用的结果，其中基因的异常表达包括多种癌基因的活化和/或多种抑癌基因的失活。FBXW7基因(F框/WD40域蛋白基因)又称hCDC4，其表达的蛋白属于F-box蛋白，是SCF(SKP1-CUL1-Fbox)泛素连接酶的靶蛋白识别组分，参与降解周期蛋白Myc，Notch1等，在人体细胞周期的进程、细胞的生长和分化中发挥着重要的调节作用，其缺失能引起和/或加快癌细胞增殖，是近年来发现的重要的抑癌基因。

FBXW7基因共有12个外显子，在人类基因组中高度保守，其表达的蛋白有3个结构域，包括F-box，WD40重复序列和D结构域。其中N末端的WD40重复序列为底物结合域。FBXW7基因在癌症中的整体突变率约为6％，而在急性T淋巴细胞白血病中的突变率高达31％，且43％的突变发生在两个突变热点：Arg465和Arg479，频率约为29％和14％。FBXW7的突变将影响自身功能，进而对下游参与细胞周期的蛋白产生影响，使血液中的白细胞上升，导致疾病发生。Akhoondi等发现FBXW7突变体可上调Cyclin E的水平并且延长其半衰期。ONeil等现FBXW 7突变体和野生型共同形成的异二聚体虽然能和作为靶标的Myc结合，但却不能正常地使其降解。2013年，King等将FBXW7突变体转入小鼠的白血病造血干细胞中，发现癌细胞大量扩增，说明该基因突变使得白血病干细胞更具侵染性。

目前，FBXW7突变对于预后的意义存在差异，主要原因是：不同的治疗方案对预后有不同的影响；白血病的成因复杂，有其他的不良因素同时干扰等。但是检测FBXW7的突变是否存在，对于白血病风险预测以及针对性制定治疗方案无疑有积极意义。

发明内容

本发明的目的在于提供检测FBXW7基因突变的寡核苷酸，采用PCR技术，可用于快速检测急性T淋巴细胞白血病患者体内的FBXW7基因外显子突变情况。所述寡核苷酸包括至少一对扩增FBXW7基因外显子的引物，所述至少一对扩增引物选自FBXW7-1F/FBXW7-1R、FBXW7-2F/FBXW7-2R、FBXW7-3F/FBXW7-3R、FBXW7-4F/FBXW7-4R、FBXW7-5F/FBXW7-5R、FBXW7-6F/FBXW7-6R、FBXW7-7/8F/FBXW7-7/8R、FBXW7-9F/FBXW7-9R、FBXW7-10F/FBXW7-10R、FBXW7-11F/FBXW7-11R、FBXW7-12F/FBXW7-12R，其碱基序列为：

FBXW7-1F:TGTAAAACGACGGCCAGTGGTTGCCGCCTGGTTTAG；

FBXW7-1R:AACAGCTATGACCATGTCCCTTTGCCAACTGCTG；

FBXW7-2F:TGTAAAACGACGGCCAGTTGTTTTTTACCCTATTTTCCCC；

FBXW7-2R:AACAGCTATGACCATGCCTCTACACCCCACACAAGC；

FBXW7-3F:TGTAAAACGACGGCCAGTATCATCACACACTGTTCTTCTGG；

FBXW7-3R:AACAGCTATGACCATGGTAACAAGACACAGGGGCTCATA；

FBXW7-4F:TGTAAAACGACGGCCAGTACAGGCGTTATATAGGAGGGAG；

FBXW7-4R:AACAGCTATGACCATGTTTGCAGCAATTAAGTGAGGC；

FBXW7-5F:TGTAAAACGACGGCCAGTCCTGATCAACTATGGTTGTGTG；

FBXW7-5R:AACAGCTATGACCATGCAATGTTTAAAGGTGGTAGCTGT；

FBXW7-6F:TGTAAAACGACGGCCAGTAAGAGCAGAGACAGAGAGGTTTA；

FBXW7-6R:AACAGCTATGACCATGATTCGGCTCATCTGAATGTGTAG；

FBXW7-7/8F:

TGTAAAACGACGGCCAGTGAAGGCAATTTACTCTTGAACTG；

FBXW7-7/8R:AACAGCTATGACCATGTGAGCTCTGATATTTGCTATCCA；

FBXW7-9F:TGTAAAACGACGGCCAGTGTGATGGGATCATTTTATACGG；