[发明专利]肺腺癌相关的miRNA、组合物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及肺腺癌相关的miRNA、组合物及其应用，更具体的涉及miR-6087、miR-7976、miR-7705、miR-6744-5p及其组合物在制备肺腺癌诊断制剂中的应用。

背景技术

肺癌是死亡率较高的恶性肿瘤之一，主要包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌，临床发病中以非小细胞肺癌居多，约占80％，非小细胞肺癌进一步可以细分为腺癌和鳞癌两大类型。近年来随着精准医疗的不断发展，肺癌的个体化治疗要求对肺癌进行分子水平的精准分型，虽然已经有很多报道披露部分肺癌的诊断分子标志物，但是仍不能满足需求，需要更多的分子标志物助力肺癌的分子分型、靶向治疗以及预后判断。

miRNA是一类长度约22个核苷酸的非编码内源性小RNA，具有多种生物学功能，对生长发育、生理功能尤其在恶性肿瘤的发生发展等过程产生重大影响，与mRNA相比，miRNA在体外更稳定，在体内代谢周期更长，因而更适合作为肿瘤分子标记物。多项研究发现miRNA和肺癌的发生发展有密切关系，例如 Yanaihara N等研究表明肺癌患者有约有66％的人的miR-21表达水平至少有2倍以上的上调，Weiss等研究发现miRNA-128b缺失的肺癌细胞对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼十分敏感。

本发明对4对癌组织及癌旁组织的样本进行转录组测序，并运用生物信息学方法进行分析，发现了几个之前从未被报道过的与肺腺癌相关的分子标志物，其中，miR-6087、miR-7976在癌组织中表达低于癌旁组织，miR-7705、miR-6744-5p 在癌组织中的表达量高于癌旁组织，进一步，荧光定量PCR实验结果验证了高通量测序的分析，表明miR-6087、miR-7976、miR-7705、miR-6744-5p很有可能成为新的肺腺癌诊断标志物，本发明为临床肺腺癌的精准诊断提供了潜在的分子标志物，具有重要的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺腺癌诊断试剂，所述肺腺癌诊断试剂能够检测肺腺癌样本中miRNA和/或其前体的表达情况，或者miRNA调控的靶基因的表达，检测所述miRNA选自下列中的一种或几种：miR-6087、miR-7976、miR-7705、 miR-6744-5p。

优选的，所述miRNA为miR-7705或miR-6744-5p或二者的组合。

优选的，所述miRNA为miR-7705、miR-6744-5p和miR-6087的组合。

所述miR-6087序列见序列表SEQ ID NO 1，其前体mir-6087序列见序列表 SEQ ID NO 2；所述miR-7976序列见序列表SEQ ID NO 3，其前体mir-7976序列见序列表SEQ ID NO 4；所述miR-7705序列见序列表SEQ ID NO 5，其前体 mir-7705序列见序列表SEQ ID NO 6；所述miR-6744-5p序列见序列表SEQ ID NO 7，其前体miR-6744-5p序列见序列表SEQ ID NO 8。

所述的样本为肿瘤组织或外周血。

进一步，肺腺癌诊断试剂基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测肺腺癌样本中miRNA和/或其前体的转录或基于免疫方法检测肺腺癌样本中其成熟miRNA调控的靶基因的表达情况。

优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE 法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测肺腺癌样本中miRNA和/或其前体的转录。

优选的，所述的用于定量PCR方法包括特异性扩增miRNA和/或其前体的引物；所述的基于探针杂交方法包括与miRNA和/或其前体的核酸序列杂交的探针。

进一步，扩增miR-6087的引物为序列SEQ ID NO 9；扩增miR-7976的引物为序列SEQ ID NO 10；扩增miR-7705的引物为序列SEQ ID NO 11；扩增 miR-6744-5p的引物为序列SEQ ID NO 12。

本发明的目的还在于提供上述miRNA和/或其前体在制备肺腺癌诊断工具中的应用。

本发明的目的在于提供一种治疗肺腺癌药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：

(a)化合物或组合物，所述化合物下调miR-7705或miR-6744-5p的转录和 /或抑制miR-7705或miR-6744-5p成熟miRNA的活性；

(b)药剂学上能接受的载体。