[发明专利]制备重组血管扩张肽的方法、表达构建体、宿主细胞及重组融合多肽

权利要求书

1.一种制备重组血管扩张VSDL肽的方法，所述方法包括以下步骤：

表达包含所述VSDL肽的串联拷贝的融合多肽，其中所述VSDL肽侧翼是位于N-末端的肽切割位点和位于C-末端的肽切割位点，其中所述VSDL肽另外不存在所述肽切割位点；和

用在肽切割位点切割的裂解剂在肽切割位点切割融合多肽；

其中切割融合多肽的步骤从融合多肽释放所述VSDL肽；和

其中所述VSDL肽由包含天然C末端精氨酸残基的天然肽序列构成；其中所述VSDL肽的每一串连拷贝的位于C-末端的肽切割位点由所述天然C末端精氨酸残基构成；和所述融合多肽中除了最后VSDL肽的每一VSDL肽串联拷贝的天然C末端精氨酸残基还作为下一个VSDL肽串联拷贝的位于N-末端的肽的切割位点；和

从所述融合多肽释放的所述VSDL肽是天然VSDL肽。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述VSDL肽包含根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者由根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列构成。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述肽切割位点是胰蛋白酶切割位点，和其中所述裂解剂是胰蛋白酶或胰蛋白酶样酶。

4.如权利要求1或2所述的方法，进一步包括步骤:

将切割的融合多肽的pH调节至低于5；和

利用至少一种阴离子交换技术从消化的融合多肽纯化所述肽。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述融合多肽由所述VSDL肽的2～20个串联拷贝构成。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述融合多肽由所述肽的3个串联拷贝构成。

7.如权利要求1或2所述的方法，其中所述融合多肽由所述肽的10个串联拷贝构成。

8.如权利要求1或2所述的方法，其中所述融合多肽包含具有C－末端肽切割位点的先导融合配偶体。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述先导融合配偶体包含C-末端精氨酸或赖氨酸残基。

10.一种表达构建体，包含编码与编码具有VSDL肽的2～20个串联拷贝的至少一个核苷酸序列操作融合的先导融合配偶体的核苷酸序列；

其中所述先导融合配偶体具有C－末端胰蛋白酶切割位点；和

其中所述VSDL肽侧翼是位于N-末端的肽切割位点和位于C-末端的肽切割位点，和所述VSDL肽另外不存在所述肽的切割位点；所述VSDL肽由包含C末端精氨酸残基的天然肽序列构成；所述VSDL肽的每一串连拷贝的位于C-末端的肽切割位点由所述C末端精氨酸残基构成；和所述融合多肽中除了最后VSDL肽的每一VSDL肽串联拷贝的C末端精氨酸残基还作为下一个VSDL肽串联拷贝的位于N-末端的肽的切割位点。

11.根据权利要求10所述的表达构建体，其中，所述VSDL肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者由根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列构成。

12.一种重组表达肽的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含如权利要求10或11所述的表达构建体。

13.一种重组融合多肽，包含与VSDL肽的2～20个串联拷贝连接的先导融合配偶体，其中所述先导融合配偶体具有C－末端胰蛋白酶切割位点，和

其中所述VSDL肽侧翼是位于N-末端的肽切割位点和位于C-末端的肽切割位点，和所述VSDL肽另外不存在所述肽的切割位点；所述VSDL肽由包含C末端精氨酸残基的天然肽序列构成；所述VSDL肽的每一串连拷贝的位于C-末端的肽切割位点由所述C末端精氨酸残基构成；和所述融合多肽中除了最后VSDL肽的每一VSDL肽串联拷贝的C末端精氨酸残基还作为下一个VSDL肽串联拷贝的位于N-末端的肽的切割位点。

14.根据权利要求13所述的多肽，其中，所述VSDL肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者由根据SEQ ID NO:2的氨基酸序列构成。