[发明专利]一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位、抗体的制备及应用

说明书

本发明公开了一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位、抗体的制备及其应用，所述抗原表位序列如SEQ ID NO.1或2所示。所述抗原表位可以被JS‑2012毒株(野生毒株)的单克隆抗体所识别，但不与Bartha‑K61毒株(疫苗株)和Vero细胞的单克隆抗体发生反应。所述抗原表位在伪狂犬病病毒抗体药物检测试剂中的应用，该应用使得伪狂犬病病毒抗体诊断抗原可以用普通化学合成方法制备，相比基因工程表达蛋白做为诊断抗原，合成抗原工艺简便，纯度更高。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体涉及一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位、抗体的制备及应用。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies，PR)，是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起多种动物发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的一种急性烈性传染病，又称Aujeszky’s病。PRV属于疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科成员，双链线状DNA病毒。猪是该病原的主要宿主和传染源，成年猪大多为隐性感染，仔猪发病主要表现为发热，食欲不振，精神萎靡，伴有明显的神经症状。妊娠母猪感染会导致流产，产死胎及木乃伊胎。随着养殖业的规模化发展，该病的发生及流行日趋严重，症状愈发明显。该病也给全世界养猪业带来了极大的经济损失。

伪狂犬病毒的gE基因位于US区，全长1.7kb，是伪狂犬病毒的主要毒力基因之一。伪狂犬病自我国发现以来一直在猪群中流行，gE基因缺失活疫苗的广泛使用使得该病得到了有效控。但由于伪狂犬病有着高度的潜伏感染特性，易在体内外环境变化的应激下爆发疫情。gE-ELISA配合gE基因缺失疫苗使用，能用血清学方法鉴别出疫苗接种猪和野毒感染住，对于伪狂犬病的防控与净化具有重要意义。随着2011年伪狂犬病在中国爆发，伪狂犬病毒毒力增强，传统疫苗不能对新出现的变异毒株提供完全保护，这提示单纯使用疫苗不可能根除伪狂犬病。为了有效控制直至根除伪狂犬病，需建立一种有效快速的血清学诊断方法以区分野毒株感染猪与疫苗免疫猪。而现有技术中并没有相关抗体的研究，也并没有相关抗原表位的研究，从而导致无法有效的区分野毒株感染猪与疫苗免疫猪。

发明内容

本发明的目的是在于提供了伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位，所述抗原表位为：编码2E5抗原表位的短肽，序列如SEQ ID NO.1：RLRRE所示，定位在161-165AA。编码5C3抗原表位的短肽，序列如SEQ ID NO.2：EMGIGDY所示，定位在148-154AA。所述抗原表位可以被JS-2012毒株(野生毒株)的单克隆抗体所识别，但不与Bartha-K61毒株(疫苗株)和Vero细胞的单克隆抗体发生反应。

本发明还有一个目的是在于提供了一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位在伪狂犬病病毒抗体药物检测试剂中的应用，该应用使得伪狂犬病病毒抗体诊断抗原可以用普通化学合成方法制备，相比基因工程表达蛋白做为诊断抗原，合成抗原工艺简便，纯度更高。

为了实现上述的目的，本发明通过以下技术措施实现.

一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位的制备方法，其步骤是：

A、利用分子生物学对gE主要抗原表位区域基因的扩增与重组质粒的构建。

B、将重组蛋白的诱导表达与纯化，

C、利用纯化蛋白进行小鼠免疫，获得杂交瘤细胞和单克隆抗体。

D、单克隆抗体的稳定性和特异性检测。

E、获得上述特异性单克隆抗体的抗原表位，并对其进行鉴定。

一种伪狂犬病病毒gE蛋白的抗原表位在制备治疗或预防伪狂犬病病毒ELISA抗体药物检测(试剂盒)中的应用，其步骤是：

1、以获得的抗原表位作为参考化学合成抗原。

2、以合成抗原制备试剂盒主要组分抗原包被板。

3、按常规方法制备试剂盒其他组分。