[发明专利]一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用。本发明在大鲵虹彩病毒MCP蛋白天然表达基因基础上，依据杆状病毒表达系统对密码子的偏爱性进行了基因修饰，并通过优化表达条件显著提升了重组表达基因在杆状病毒表达系统中的表达效率。在此基础上，本发明应用免疫磁珠法对表达的目的蛋白进行纯化，该纯化方法具有很高的纯度和收率。本发明还公开了一种检测大鲵虹彩病毒抗体的ELISA检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用。

背景技术

中国大鲵(Chinese giant salamander，Andrias davidianus)是现存个体最大的两栖动物，俗名“娃娃鱼”，是我国的珍贵特产，属于国家二级保护动物。近年来在我国的陕西、湖北、湖南、浙江、贵州等省份的大鲵主养区暴发了大鲵虹彩病毒病(Chinese giantsalamander iridovirus disease，CGSIVD)，该病可感染各种规格的养殖大鲵，死亡率高达90％以上，给大鲵养殖业造成了巨大的经济损失。

大鲵虹彩病毒病的病原为大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamanderiridovirus，CGSIV)，是虹彩病毒科(Iridoviridae)，蛙病毒属(Ranavirus) 的成员。虹彩病毒(Iridoviruses)是一类病毒粒子较大，呈二十面体状的双链DNA病毒。虹彩病毒科(Iridoviridae)分为五个属：绿虹彩病毒属 (Chloriridovirus)，虹彩病毒属(Iridovirus)，淋巴囊肿病毒属 (Lymphocystivirus)，巨大细胞病毒属(Megalocytivirus)和蛙病毒属 (Ranavirus)。虹彩病毒可感染无脊椎动物(绿虹彩病毒属，虹彩病毒属)及变温脊椎动物(蛙病毒属，淋巴囊肿病毒属，巨大细胞病毒属)，包括两栖类、爬行类、甲壳类、软体动物、昆虫及鱼类等。脊椎动物虹彩病毒，尤其是蛙病毒属的一些成员已经成为导致变温动物发病的一个重要原因。

为有效防控CGSIV的流行，目前众多学者针对CGSIV建立多种诊断方法，如环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)检测方法、巢式PCR法等检测方法(刘星星，等.2014；Meng，et al.，2013)。但这些方法均是建立在PCR检测原理基础之上，或者易污染，结果假阳性率较高，或者需要的仪器设备较为昂贵，用时较长，现场使用不便利。实际生产和科研都亟需更为简便、快速的免疫学检测方法用于现场CGSIV的检测和筛查。血清学检测方法是病毒性疾病的主要免疫学方法。其中通过检测感染后机体产生特异性抗体可以及早对机体是否感染病毒做出较为准确的判断。研究表明，动物在感染虹彩病毒或接种相应病毒灭活疫苗最早一周之内，就可以检测到特异性的抗体(Maniero，et al.，2006；Liu，et al.，2014)。ELISA检测方法以其操作简便，检测样本量大等优点已经成为病毒血清学检测的主要手段。而在血清学检测方法的建立中，抗原的纯度和良好的抗原性是基础。