[发明专利]一种降低最低检出限检测牛奶中β‑内酰胺酶残留的方法

权利要求书

1.一种降低最低检出限检测牛奶中β-内酰胺酶残留的方法，其特征在于：利用pH计法做单因素试验确定酶最适反应温度、酶反应最适底物浓度、酶反应最适反应时间，再进行酸碱滴定法检测样品中β-内酰胺酶含量，并检测出最低检出限。

2.根据权利要求1所述的一种降低最低检出限检测牛奶中β-内酰胺酶残留的方法，其特征在于：所述酸碱滴定法具体包括如下步骤：

(1)用无抗奶粉和50℃-100℃温水以1：6至1:10的比例配置成牛奶，冷却至室温后分别装入五组锥形瓶，每组5-10ml；

(2)向步骤(1)中的锥形瓶中分别加入浓度为0.01-1g/ml的青霉素储备液和浓度为1-10U/μl的β-内酰胺酶储备液，震荡均匀；

(3)将步骤(2)中的锥形瓶以保鲜膜封口并置于酶最适反应温度水浴锅中水浴，水浴完成后以沸水浴灭菌5-20s；

(4)灭菌后向锥形瓶中加入指示剂，震荡均匀并观察颜色变化，以NaOH进行滴定，记录滴定数据；

(5)根据滴定数据计算产酸速度和酶浓度。

3.根据权利要求2所述的一种降低最低检出限检测牛奶中β-内酰胺酶残留的方法，其特征在于：所述步骤(4)滴定时NaOH浓度为0.001-0.005mol/L或0.010-0.015mol/L，滴定量为8ml—12ml。

4.根据权利要求2所述的一种降低最低检出限检测牛奶中β-内酰胺酶残留的方法，其特征在于：所述步骤收(3)中指示剂为甲基红指示剂，用量为1-10滴。

5.根据权利要求1所述的一种降低最低检出限检测牛奶中β-内酰胺酶残留的方法，其特征在于：所述步骤(2)中五组锥形瓶中β-内酰胺酶储备液用量为0μl、3μl、4μl、5μl、6μl。