[发明专利]一种重组人IL-24蛋白的PEG修饰方法有效
| 申请号： | 201710414629.4 | 申请日： | 2017-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN107118269B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 江红;马群风;郑晓飞;张耀;王俊峰;张驰;史亦南;葛建林;化计磊 | 申请（专利权）人： | 北京交通大学 |
| 主分类号： | C07K14/54 | 分类号： | C07K14/54;C07K1/107;A61K38/20;A61K47/60;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京鸿元知识产权代理有限公司 11327 | 代理人： | 陈英俊;许向彤 |
| 地址： | 100044*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 il 24 蛋白 peg 修饰 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组人IL-24蛋白的PEG修饰方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.构建人IL-24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体，其中，所述载体为pET-28a，所述宿主菌为大肠杆菌BL21，诱导剂为IPTG，IPTG终浓度为0.5mM；
b.选择变性剂，对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白，其中，变性前先洗涤所述包涵体，包涵体洗涤液为1% Triton X-100、1 M NaCl和2M脲；所述变性剂为20mM，Tris-HCl缓冲液, 6M盐酸胍，1%β-巯基乙醇；
c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白，其中，所述复性条件为酸性，pH 5.5，复性溶液为20mM HAc-NaAc ，1mM GSH，1mM GSSG，和2M脲；
d. 在添加SDS条件下，对所述复性后的蛋白凝胶过滤纯化，脱盐除去SDS，得到纯化后的目的蛋白；
e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品，其中，修饰条件为酸性，所述PEG修饰剂为mPEG-ALD。
2.一种采用权利要求1所述的PEG修饰方法修饰的重组人IL-24蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用，其中，所述肿瘤为黑色素瘤。
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