[发明专利]一株忽地笑内生细菌伯克霍尔德氏菌HDXY‑02及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一株忽地笑内生伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)HDXY-02，同时还涉及一种防治植物真菌病害的伯克霍尔德氏菌HDXY-02的培养方法及用途。

背景技术

水稻纹枯病又称云纹病，由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)感染得病，多在高温高湿条件下发生。纹枯病在南方稻区造成的灾害尤为严重，是当前水稻生产上的主要病害之一，该病可使水稻不能抽穗，或抽穗的秕谷较多，粒重下降。由于抗水稻纹枯病的水稻品种的缺乏，目前化学杀菌剂仍然是防治水稻纹枯病的有效手段，其中井冈霉素和艾米是应用的主要农药，艾米的大量使用会对环境造成污染，而且耐艾米的纹枯病菌的出现率也有较大提高；另外，近年来，随着井冈霉素的持续使用，田间也发现了抗井冈霉素的菌株。因此，寻找新的防治水稻纹枯病的措施成为植物病害防治工作的重中之重。

作为植物微生态系统的天然成员，某些内生细菌可通过产生抗生素、水解酶类等抗菌活性物质来抑制病原菌，以达到防治植物病害的目的。利用微生物防治植物真菌病害具有对环境无污染、对人畜无害、减缓病原菌抗药性产生等优点，已成为当前防治植物病害的热点。从棉花、水稻、辣椒、番茄等作物中分离到了多株对植物病害具有良好防治效果的内生细菌，其中有的己经进入应用阶段，并产生了一定的社会效益和环境效益。

前期从忽地笑根中分离到一株具有抗真菌活性的伯克霍尔德氏菌HDXY-02，该菌株对多种植物病原真菌具有较好防效，尤其是对水稻纹枯病菌抑制效果最好。伯克霍尔德氏菌作为生防菌可对植物病害进行防治，其可被制为生物杀菌剂，能够部分替代化学农药，已有几株伯克霍尔德氏属的生防菌被递交到美国环保署(EPA)并登记作为生物农药。因此，该属菌株在农业生产和环境保护中可起到重要的作用，有良好的应用前景。

发明内容：

本发明的目的是提供一株对病原真菌具有良好拮抗活性的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)HDXY-02，所述伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)HDXY-02菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14054，保藏 日期为2017年4月20日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

所述伯克霍尔德氏菌HDXY-02的生物学特性为：革兰氏染色阴性(G^─)，细胞为短杆状，无芽孢，好氧，氧化酶试验阳性，明胶液化反应阳性、接触酶反应阳性；在牛肉膏蛋白胨培养基固体培养基上菌落呈淡黄色，圆形，边缘整齐表面光滑，隆起。

所述伯克霍尔德氏菌HDXY-02，来源于健康的忽地笑根部，对水稻纹枯病具有良好生防效果。扩增所述菌株HDXY-02的16S rDNA序列，经NCBI在线比对，结合生理生化试验结果确定菌株HDXY-02为伯克霍尔德氏菌。

本发明的另一个目的是在于提供了一种防治植物真菌病害的伯克霍尔德氏菌HDXY-02的培养方法。包括伯克霍尔德氏菌HDXY-02在发酵培养基中培养的步骤。

所述的伯克霍尔德氏菌HDXY-02或以伯克霍尔德氏菌HDXY-02为活性成分的菌剂在生产中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的又一目的是提供一种制备生防菌剂的方法，该菌剂的活性成分为所述的伯克霍尔德氏菌HDXY-02。通过制备含有伯克霍尔德氏菌HDXY-02的发酵液或含有伯克霍尔德氏菌HDXY-02的发酵液经过滤后得到的无菌发酵上清液，所述的无菌发酵上清液使用伯克霍尔德氏菌HDXY-02发酵液经过离心取得的上清液，再经过细菌滤器过滤获得。制备方法简便易行，未使用有机溶剂，对环境安全无污染。

本发明还提供上述伯克霍尔德氏菌HDXY-02在抑制水稻纹枯病菌中的应用。所述伯克霍尔德氏菌HDXY-02的发酵产物能有效抑制水稻纹枯病菌菌丝的生长。

上述忽地笑内生细菌HDXY-02在抑制病原真菌中的应用，即伯克霍尔德氏菌HDXY-02对病原真菌的抑制作用还包括：水稻稻瘟病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌和油菜菌核病菌，因此，该忽地笑内生细菌HDXY-02可应用于防治水稻纹枯病、水稻稻瘟病、小麦赤霉病、棉花枯萎病和油菜菌核病。