[发明专利]一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法

权利要求书

1.一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，选择优秀且适宜母奶牛作为供体，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

a、超数排卵：在所选母奶牛发情的前4d,即发情周期的第16天或第17天，在肌肉或皮下注射PMSG1500-3000IU；

b、人工授精：经过超数排卵处理的母奶牛发情后，选择优良公牛的的精液，在适宜时间进行人工授精；

c、冲胚：利用二路式导管冲卵器，将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后导出冲洗液，及可获得所需胚胎冲洗液；

d、胚胎的检查：把步骤c收集到的冲洗液，静置10min,待胚胎下沉后，移去上层液，放在显微镜下检查数量和发育情况；

e、胚胎冷冻：把胚胎放在含有防冻剂的杜氏培养液中采取缓慢降温冷冻；

f、胚胎解冻：可直接放在室温中解冻，解冻清除掉防冻剂；

g、胚胎分离：利用显微操作仪对胚胎进行半胚以上分割；

h、胚胎移植：采用非手术移植，一只手伸入直肠，检查黄体位于哪一侧和发育情况，然后握住子宫颈，另一手将移植管插入与黄体同侧的子宫角内，注入胚胎。

2.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤a中一次肌注上述量的PMSG，隔日再注射PGF2a30～40mg。

3.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤b中，人工授精应使用活率高密度大的精液，而且将授精次增加到2次或3次，两次间隔8～10h。

4.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：步骤c中所述冲洗液为杜氏磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述冲胚一般在人工授精6～8d进行。

6.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤e，在冷冻前需先依次经过含有由低浓度到高浓度防冻剂的杜氏培养液，防冻剂的最高梯度为1.0～1.5mol/l，每种深度中停留5～10min，在最后一种深度中降温冷冻。

7.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤e，在冷冻时必须采取缓慢降温，由室温降至-5℃～-7℃，每分钟降1℃，在此温度下进行诱发结冰，然后按每分钟降0.3℃～0.5℃的速度降至-33℃～-38℃，此后可直接浸入液氮保存。

8.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤f,解冻后加入蔗糖液稀释。

9.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：所述步骤h,胚胎移植的受体可以选择黄牛或其它种牛。

10.根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在于：为了控制和提高奶牛母犊的出生率，将提供精液的公牛右睾丸带阳性精子的输精管人工结扎，确保左睾丸排出带阴性的X精子，以及将供体母牛右卵巢输卵管进行结扎，确保左卵管排出带阴性的X卵。