[发明专利]一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用在审
申请号: | 201710421395.6 | 申请日: | 2017-06-07 |
公开(公告)号: | CN107236797A | 公开(公告)日: | 2017-10-10 |
发明(设计)人: | 李建华 | 申请(专利权)人: | 苏州市李良济健康产业有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司32200 | 代理人: | 楼高潮 |
地址: | 215163 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 鉴定 中药 党参 引物 及其 应用 | ||
1.一种用于鉴定中药党参的引物对,其特征在于,所述引物对及其序列为:P1,SEQ ID NO.1~2;P2,SEQ ID NO.3~4;P3,SEQ ID NO.5~6。
2.根据权利要求1所述的一种用于鉴定中药党参的引物对,其特征在于,所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5,端加上特异性的GC发卡结构,所述发卡结构的长度为40bp,序列为SEQ ID NO.7。
3.权利要求1或2所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述试剂盒的组分包括:引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括:
(1)提取党参样品的基因组DNA;
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板,以P1为特异性引物,进行第一轮PCR扩增;
(3)取步骤(2)的扩增产物,稀释100~1000倍后作为第二轮PCR的模板,以P2作为特异性引物,进行第二轮PCR扩增;
(4)取第二轮PCR扩增的产物,稀释10~100倍后作为第三轮PCR的模板,以P3作为特异性引物,进行第三轮PCR扩增;
(5)收集第三轮PCR扩增的产物,并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增的程序为:95℃,2min;95℃,30s,52℃,30s,72℃,55s,35个循环;72℃,7min。
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