[发明专利]一种测量不同小鼠冷痛模型行为差异的方法及其专用装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种测量不同小鼠冷痛模型行为差异的方法及其专用是装置。

背景技术

疼痛治疗的研究一直是神经疾病治疗中最有挑战性的热点问题，剧烈疼痛常难以控制，严重影响患者生活质量。在疼痛近几十年的研究历史中，科学家们一直致力于复制出更能反映人类疼痛特性的动物模型。这些动物模型部分再现了人类所表现的疼痛、痛觉过敏以及轻触、压觉等引起的疼痛反应等症状。这些动物模型的成功复制，是我们研究疼痛产生机制的基础，为人类认识疼痛的产生机制以及筛选更好的治疗药物提供了有效工具。在此，疼痛行为的测定及精确定量成为我们对动物疼痛研究的关键。

动物疼痛行为的测定主要包括以下几种方法：(1)机械性痛觉超敏测定：一般通过Von Frey纤维细丝刺激的缩足反应来测定机械性痛觉超敏，此外还有一些研究通过后爪压力测试来测定该指标。(2)热痛觉超敏测定：常用的有热板实验和浸尾实验两种方法。通过热刺激痛觉超敏的测定可以判断骨癌痛模型动物热痛行为的异常。(3)冷痛觉超敏测定：常用的有冷板实验和丙酮低温实验。通过冷刺激痛觉超敏的测定可以判断骨癌痛模型动物冷痛觉行为的异常。(4)自发性痛觉行为观察：观察自发性的退缩或抬脚行为。通过自发性痛觉行为观察可以判断骨癌痛模型动物自发性痛觉行为的异常。

在以上几种疼痛行为的测量中，以冷痛的行为最为难以测量。在过去的方法中冷板实验和丙酮低温试验用的较多。丙酮低温试验主观性较强，人为因素影响较大，所以，较为客观的冷板实验使用更为广泛。目前市场上使用的冷测痛仪价格高昂(UGO冷板仪约12万人民币)，普通实验室难于推广应用，因此一种简易的，有效的，容易推广的冷痛测量仪器的制作成为关键。我们发明的简易冷痛测量仪器具有相同的检测效果，可以作为检测冷痛行为简易的有效工具。本发明建立的机玻璃板冷板测痛仪使用方便，价格低廉，极具研究价值和市场推广前景。

为了证实我们制作的冷板仪冷痛测量的效果，我们从以下三种常用的小鼠疼痛模型上验证新冷板仪的有效性。1、骨癌痛小鼠动物模型(BCP)冷痛行为测量；2、神经病理性痛小鼠(CCI)冷痛行为测量；3、甲醛致痛冷痛行为测量。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了克服现有冷痛行为测量的缺陷，提供一种冷痛测量的新的工具及其测量小鼠疼痛模型行为差异的方法。本发明提供的测量小鼠冷痛行为的装置能准确测量反映小鼠冷痛行为。本发明提供的方法有利于研究冷痛行为相关的疾病，可以最大程度的反映小鼠冷痛行为的差异，有利于模拟临床上各种疾病对冷痛敏感的定量测量，也有利于研究各种疾病引起的疼痛发病机制及治疗疾病的药物靶点设计，应用前景广阔。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种测量小鼠冷痛行为的装置，它包括箱体，安装在箱体内的柱状筒，位于柱状筒顶部的盖板；所述的盖板表面开设有小孔，柱状筒底部距离箱体20～25mm高度位置开设有小孔。柱状筒内设有有机玻璃板。

作为优选方案，以上所述的测量小鼠冷痛行为的装置，盖板表面开设有10～14个直径6mm的小孔；柱状筒底部距离箱体(3)20～25mm高度位置开设有4个直径6mm的小孔。

有机玻璃板(5)的直径为120mm，厚度为2mm。

一种测量不同小鼠疼痛模型行为差异的方法，包括以下步骤：

步骤1：

(1.1)取5-6周龄小鼠，每组各20只，用1％戊巴比妥50mg/kg,腹腔注射麻醉起效后，固定于仰卧位，左侧后肢剃毛，络合碘消毒皮肤，膝关节处沿股直肌肌腱方向切约0.5-1cm的皮肤切口，切开髌韧带，暴露髁间窝伸面，采用1ml注射器针头从近髁间窝位置进针，按股骨长轴方向钻孔进入股骨骨髓腔后，换用微量注射器在骨髓腔内接种培养的Lewis肺癌细胞(1×10⁷个/ml)，留针片刻后退出针头，用骨蜡封针孔，然后采用无菌棉签沾生理盐水清洗伤口，丝线缝合皮肤、皮下组织。金霉素软膏覆盖伤口，待小鼠麻醉苏醒后放回鼠笼；

(1.2)48小时后，选取实验组动物，放入未加冰的柱状筒(2)里，盖上盖子(1)，适应30分钟；然后在柱状筒(2)和箱体(3)内加冰，并用有机玻璃板放在柱状筒(2)内的冰上，压紧，5分钟后小鼠置于冰上的有机玻璃板上，录像60分钟，记录小鼠抬脚次数；

(1.3)根据录像统计对照组和造模组小鼠60分钟内抬脚次数，分析数据，对造模成功的动物进行筛选，14天冷痛行为有差异的为造模成功；

步骤2：