[发明专利]特异性抑制CA7基因表达的siRNA及其重组载体和应用

说明书

本发明公开了一种特异性抑制CA7基因表达的siRNA及其重组载体和应用，属于分子生物学与生物医药技术领域。所述siRNA，包括正义链和反义链，正义链：5’‑UGAUUGGCGAUCUCCCUGGGC‑3’；反义链：5’‑CCAGGGAGAUCGCCAAUCACC‑3’。本发明提供的siRNA可以特异性、高效地抑制CA7基因的mRNA和蛋白表达，减少细胞增殖，增加细胞凋亡，降低细胞迁移和侵袭能力，并能有效逆转卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药。本发明还提供了所述CA7 siRNA及其重组载体在制备治疗卵巢癌、神经胶质瘤、结直肠癌、或逆转卵巢癌耐药的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种特异性抑制CA7基因表达的siRNA及其重组载体和应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)，又叫基因沉默，是动植物中广泛存在的序列特异性转录后基因沉默机制。2001年Tuschl和他同事发现体外培养的哺乳动物细胞转染人工合成的21-23nt的双链siRNA分子可以模拟RNAi作用，进一步研究发现短于21bp或者长于25bp的双链RNA(dsRNA)均不能有效启动RNAi，而且其中间序列只要有一个碱基的错配，基因沉默的效应就明显减退甚至消失，充分体现了其作用的特异性。

正因为RNAi作用具有很高的特异性和高效性，为基因的功能研究提供了强有力的研究工具，利用小分子干扰RNA(siRNA)作为基因沉默的方法被广泛用于恶性肿瘤机制的研究，大力推动了以该技术为基础的肿瘤特异高效治疗策略的研发进程。

卵巢癌是女性第二大常见恶性肿瘤，是女性恶性肿瘤致死的主要原因，在早期很少有症状表现，60％以上的妇女在明确诊断时已是III期或IV期，已发生广泛转移，预后很差。标准的治疗手段为卵巢肿瘤细胞减灭术加后续化疗，但大多数患者还是会因为化疗耐药、肿瘤复发最终死亡，五年生存率极低(30％左右)。如何改善卵巢癌的治疗效果、寻找卵巢癌化疗耐药的解决方案，是妇科肿瘤学家面临的最严峻挑战。

分子靶向药物和化疗联合应用是目前提高恶性肿瘤患者生存率最有前景的治疗方法。CA7(carbonic anhydrase 7)基因是碳酸酐酶家族成员之一，染色体定位在16q22.1，是金属酶的一种，能把二氧化碳可逆的转化为碳酸氢钠和质子，参与了多个生理和病理的分子机制，如：糖异生、脂肪合成、尿素生成和肿瘤的发生。我们先期的研究结果显示CA7在卵巢癌中是高表达的。但是该基因是否与卵巢癌发病有关还有待进一步研究。

因此，采用RNAi技术对CA7基因进行特异性的表达干扰，对卵巢癌发病机制的研究是个重要补充，是对卵巢癌靶向治疗及其耐药治疗的重要探索和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性抑制CA7基因表达的siRNA，用于卵巢癌发病机制研究。本发明的另一个目的在于提供该siRNA在制备治疗卵巢癌和紫杉醇耐药的卵巢癌药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明设计、合成3对特异性抑制CA7基因表达的siRNA，分别转染到卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/taxol中，结果发现S1抑制CA7基因表达的干扰效果最明显。

本发明提供了一种特异性抑制CA7基因表达的siRNA(S1)，包括正义链和反义链，

所述正义链：5’-UGAUUGGCGAUCUCCCUGGGC-3’(SEQ ID NO.1)；

所述反义链：5’-CCAGGGAGAUCGCCAAUCACC-3’(SEQ ID NO.2)。