[发明专利]一种检测黄曲霉素B1的试纸条及方法

说明书

本发明提供了一种发卡式单链DNA，由a、b、c三段串联组成，其中，b段为黄曲霉素B1的适配体序列，a段可与c段互补，a段包含3‑30个核苷酸。本发明还提供了一种检测黄曲霉素B1的试纸条、该试纸条的用途及一种检测样品中黄曲霉毒素B1的方法。本发明发卡式单链DNA及试纸条及方法可以准确检测黄曲霉素B1，灵敏度和特异性高、适用性广，检测快速、简便，成本低廉，可以大量推广使用，应用前景良好。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种检测黄曲霉素B1的试纸条及方法。

背景技术

黄曲霉素B1(AFB1)是由黄曲霉和寄生曲霉等所产品的一种次生代谢物，其进入人体或者动物体内后，会导致急、慢性毒性，严重时，会导致人体或动物体发生癌变或畸变。近年来，黄曲霉素B1(AFB1)超标现象频繁的出现在各种食品、药品中，对人的健康构成严重威胁。

目前，检测AFB1的方法有很多，常用的有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、色谱质谱联用法、酶联免疫吸附法等。这类方法要么检测仪器和成本昂贵，要么存在操作不便、检测时间长等问题。

适配体(aptamer)为一种人工合成的单链的DNA或RNA序列，对特定的靶分子(如小分子，蛋白质等)具有很高的特异性，被认为是一种化学抗体。AFB1的特异性适配体于2012年被加拿大的Neoventures Biotechnology Inc公司首次报道。之后，基于适配体构建的AFB1的检测方法就越来越引起关注。目前，利用AFB1适配体建立的AFB1试纸条的检测方法有胶体金层析法、侧向层析定量法等，但灵敏度普遍较低。

公开为CN 105784990A的专利申请公开了一种利用适配体检测黄曲霉毒素B1的试纸条及检测方法，检测黄曲霉毒素B1的灵敏度为0.5ng/ml，仍需进一步改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测黄曲霉素B1的试纸条及方法。

本发明提供了一种发卡式单链DNA，由a、b、c三段串联组成，其中，b段为黄曲霉素B1的适配体序列，a段可与c段互补，a段包含3-30个核苷酸。

其中，b段的序列如SEQ ID NO.1所示。

其中，由a、b、c三段串联组成的序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明还提供了上述DNA在制备检测黄曲霉素B1的试剂或试纸中的用途。

本发明还提供了一种用于检测黄曲霉素B1的试纸条，它包括上述DNA。

其中，它还包括SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的序列。

其中，如图2(1)所示，试纸条包括样品吸收垫、标记物结合垫、反应膜和吸水纸垫、底板，反应膜上有检测区和质控区，标记物结合垫包被有标记探针，所述标记探针为荧光团标记的上述DNA；

检测区包被有检测探针，所述检测探针为生物素标记的一种核苷酸序列，其由二段串联组成；一段为SEQ ID NO.3所示的序列，另一段为SEQ ID NO.1所述序列的非互补链，包含0-50个核苷酸；

质控区包被有质控探针，所述质控探针为生物素标记的一种核苷酸序列，其与黄曲霉素B1的适配体序列互补；

优选地，

所述荧光团为荧光微球、胶体金，量子点，荧光蛋白，鲁米诺，Cy5；

所述检测探针为生物素标记的SEQ ID NO.4所示序列；

所述质控探针为生物素标记的EQ ID NO.5所示序列；

其中，所述生物素还偶联了链霉亲和素。

本发明还提供了上述试纸条的制备方法，步骤如下：