[发明专利]同时检测奶牛β-酪蛋白不同变体型的一组专用引物及其试剂盒

权利要求书

1.同时检测奶牛β-酪蛋白不同变体型的一组专用引物和探针，其特征在于，包括多重PCR扩增引物和多重连接酶检测反应探针，

所述多重PCR扩增引物的序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:4所示；多重连接酶检测反应探针的序列如SEQ ID NO:5-SEQ ID NO:28所示。

2.同时检测奶牛β-酪蛋白不同变体型的专用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括多重PCR扩增体系和多重连接酶检测反应体系，

多重PCR扩增体系包括多重PCR扩增引物混合溶液，所述多重PCR扩增引物的序列如SEQID NO:1-SEQ ID NO:4所示；

多重连接酶检测反应体系包括多重连接酶检测反应探针混合溶液，多重连接酶检测反应探针的序列如SEQ ID NO:5-SEQ ID NO:28所示。

3.根据权利要求2所述的专用试剂盒，其特征在于，多重PCR扩增体系包括多重PCR扩增引物混合溶液、dNTP、Taq酶、Mg²⁺、PCR Buffer、ddH₂O；

多重连接酶检测反应体系包括多重连接酶检测反应探针混合溶液，Taq DNA ligase、ddH₂O、连接酶检测反应Buffer。

4.根据权利要求3所述的专用试剂盒，其特征在于，多重PCR扩增体系采用20µl反应体系，组成为： 2µl 0.5pM的多重PCR扩增引物混合溶液、2µl 2mM/each的dNTP、0.2µl 1µ酶活力单位的Taq酶、0.6µl 3mM的Mg²⁺、2µl 1×PCR Buffer、12.2µl ddH₂O；

多重连接酶检测反应体系采用10µl反应体系，组成为：1µl 1×连接酶检测反应Buffer、1µl 2pmol/µl的多重连接酶检测反应探针混合溶液、0.05µl 2µ酶活力单位的TaqDNA ligase、4µl ddH₂O。

5.根据权利要求2-4任一项所述的专用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA提取试剂和/PCR产物纯化试剂。

6.根据权利要求2-4任一项所述的专用试剂盒，其特征在于，多重PCR扩增引物混合溶液中SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:2引物对与SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:4引物对的浓度比例为1:2-1:1。

7.一种检测β-酪蛋白不同变体型A1、A2、A3、B、C、E、F、H1、I奶牛的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用权利要求1所述多重PCR扩增引物，对奶牛DNA进行多重PCR扩增；

（2）以步骤（1）所述多重PCR扩增产物为模板，利用权利要求1所述多重连接酶检测反应探针，进行多重连接酶检测反应；

（3）检测不同SNP位点，获得β-酪蛋白变体型。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述奶牛DNA从含有有核细胞的任何组织中得到。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述组织为该奶牛的血液、精液、毛发或奶。