[发明专利]一种促再生型神经组织工程支架的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促再生型神经组织工程支架的制备方法，属于医用材料领域。

背景技术

神经组织在受到来自于内部和外界的各种致伤因素的作用下会发生一系列的病理生理学变化。神经干内的结构可分为神经纤维、神经束、纤维结缔组织、血管、淋巴管和神经外膜五部分。神经退变过程中主要的变化是神经纤维退变造成神经内膜、神经束皱缩及纤维结缔组织的增生，引起神经干各结构成分的变化，从而影响神经的再生速度及修复效果。神经退变越严重，修复后轴突的生长越易受到纤维结缔组织的阻挡，速度越缓慢，甚至不生长。支架常用的支架材料有两大类：一种是天然材料，主要有水凝胶、壳聚糖、胶原等；另一种是人工合成的聚合物，主要有聚羟基乙酸（PGA）、聚乳酸（PLA），聚乳酸聚羟基乙酸共聚体（PLGA）等。支架功能的要求不仅仅是暂时固定并支持缺损神经的两端，提供一个相对隔绝的微环境，引导神经元的轴突轴向生长，还要具有适当的孔径和孔隙率，允许组织液和营养物质自由交换，能为神经再生富集所需要的神经营养因子。

单用神经导管虽能较好地修复10mm以下的缺损，但对10mm以上者则难修复，可能是因为开始阶段缺少细胞外基质支架。因此人们尝试使用各种导管填充材料来促进再生，常用的材料是一些凝胶，包括形成纤维蛋白凝胶的透析血浆、胶原凝胶、含层粘连蛋白的凝胶等。这些凝胶都能不同程度地增加导管修复神经缺损的长度，但较之自体神经移植的效果还有一定差距。自体神经移植由于供体神经切取后，必然引起供区感觉障碍；有可能发生创伤性神经瘤，引起局部疼痛；附加的神经切取术使手术时间延长，增加供区瘢痕，而且神经粗细的变异使切取的神经未必适合与受区匹配；可供牺牲利用的供体神经来源有限，大大限制了自体神经移植术的应用；周围神经修复后的再生和功能恢复难以达到正常水平，所以制备一种可以促进其自我再生修复神经的工程支架很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对传统神经组织工程支架材料周围神经修复后的再生和功能恢复性较差，导致引起供区感觉障碍或局部疼痛的问题，提供了一种促再生型神经组织工程支架的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

（1）取100～150g干燥石莼与1000～1500mL质量分数80％乙醇溶液混合，经水浴加热后离心分离，收集下层沉淀并干燥碾磨得脱脂石莼，取80～100g脱脂石莼和1200～1500mL质量分数1％氢氧化钠溶液，水浴加热并调节pH至7.0，过滤得滤液，将滤液旋转蒸发得浓缩液，按质量比1:10，将浓缩液与无水乙醇混合并静置陈化，过滤得滤饼，干燥得改性颗粒；

（2）取2～3g鹿茸，球磨并过200目筛，得鹿茸粉末并按质量比1:10，将鹿茸粉末与pH为6.8的磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液混合，匀浆处理后静置，再离心分离收集上层清液，旋转蒸发得蛋白聚糖浓缩液；

（3）按重量份数计，分别称量45～50份0.05mol/L醋酸溶液、1～2份改性颗粒、1～2份蛋白浓缩液和45～50份去离子水混合，在5～6kPa、0～5℃冰水浴条件下静置得混合悬浊液，将混合悬浊液浇注至模具中，将模具冷冻保存并浸入液氮中，静置处理；

（4）将静置处理后的模具取出并脱模得冷冻物料，洗涤后紫外灭菌处理并静置20～24h，即可制备得一种促再生型神经组织工程支架。

步骤（1）所述的调节pH采用的是质量分数5％的盐酸。

步骤（4）所述的紫外灭菌处理条件为，在0～5℃下，用紫外线发生器以500μW/m²剂量照射处理1～2h。

本发明与其他方法相比，有益技术效果是：

（1）本发明以石莼为原料，通过提取石莼多糖并进行改性，清除神经组织工程支架中的自由基，提高抗脂质过氧化的作用，同时与鹿茸中提取的蛋白聚糖重复结合，与胶原蛋白混合并浇注冷冻成型，成型制备的工程支架具有纵行平行排列的孔道系统，与神经组织内部结构极其相似，有利于神经细胞再生，提高支架移植后神经细胞的再生和功能恢复性；

（2）本发明将鹿茸中提取的蛋白聚糖固定于细胞外基质中，通过蛋白聚糖在支架表面进行富集，修复受到损伤周围环境中的神经营养因子，更好地保护和引导神经再生促进神经细胞再生活性，有效提高工程支架对神经细胞的促再生功能，缩短神经细胞修复时间，改善修复区域的感觉障碍，减轻患者局部疼痛。

具体实施方式