[发明专利]检测结直肠癌患者PIK3CA基因突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体来说是一种检测结直肠癌患者PIK3CA基因突变的试剂盒。

背景技术

PIK3CA基因是由Volinia在1994年利用原位杂交技术检测到的，其定位于3q26.3，长34kb，包含21个外显子，编码1 068种氨基酸，该组氨基酸产生一组长124kD的蛋白。PIK3CA编码I类磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylino-sitol 3-kinases,PI3Ks)的p110催化亚单位，即PI3Kp110a，PIK3CA的突变约4/5发生在螺旋区(exon9)和激酶区(exon20)这两个热点区域。

结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。在中国,结直肠癌的发病率和死亡率均居所有肿瘤的前十位，2014年其中发病率和死亡率分别为16/10万和7.5/10万。在我国结直肠癌的发病率和死亡率也日益上升，在大城市中每年以4％的增长速度上升，随着人们生活方式、饮食结构的改变，平均寿命的提高，结直肠癌的发病率可能还将进一步上升。

随着阿司匹林的应用的大幅度推广，未来对于阿司匹林的用药效果评估将会越来越重视，而PIK3CA就是其中重要的指标之一。近年来，随着新的分子靶向药物的研发和个体化治疗的应用，使转移性结直肠癌患者的存活率有了显著改善。人们逐渐认识到靶向药物治疗与相关基因检测之间的密切联系，因此对结直肠癌的分子生物学及分子靶向治疗的研究已成为目前肿瘤治疗及预后判断的热点之一。目前各省市大型三甲医院的PIK3CA基因突变检测平台陆续开展。临床研究表明，PIK3CA基因突变的转移性结直肠患者对阿司匹林药物产生耐药的疗效更好，根据检测结果预测使用阿司匹林的治疗效果。

大部分肿瘤的突变都是体细胞突变，突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起。因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA，所以对体细胞突变检测需要较高的特异性，而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限，不能完全满足临床需要。特异性探针法如以Scorpions ARMS为代表的英国DxS和中国厦门Adx的PIK3CA检测试剂盒虽然检测灵敏度高，但其检测费用较高，不适合国内NSCLC患者的常规检测和筛查，因此，临床迫切需要开发一种快速准确、操作简便、灵敏度高的检测PIK3CA基因突变的试剂盒，满足临床用药和检测诊断的时效性要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中的检测灵敏度低、操作不便的缺陷，而提供一种检测结直肠癌患者PIK3CA基因突变的试剂盒。

本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种检测结直肠癌患者PIK3CA基因突变的试剂盒，由以下组分组成：PCR反应液192ul、酶系1 24ul、EC/IC引物探针24ul、E542K/IC引物探针24ul、E545K/IC引物探针24ul、E542D/IC引物探针24ul、H1047R/IC引物探针24ul、H1047L/IC引物探针24ul、阳性对照200ul、阴性对照500ul。

作为优选，所述的PCR反应液的组分为5×PCR buffer(Mg2+Plus)、dN(U)TPs，所述的酶系1的组分为Hitaq、UNG，所述的EC/IC引物探针、E542K/IC引物探针、E545K/IC引物探针、E542D/IC引物探针、H1047R/IC引物探针、H1047L/IC引物探针的组分均为引物、探针和水，所述的阳性对照为含有目的基因片段的质粒菌，所述的阴性对照为DEPC-H2O；

作为优选，所述的特异引物与探针包括如下序列：