[发明专利]一种基于SANH的共载siRNA和阿霉素的MSR-1磁小体复合物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于SANH的共载siRNA和阿霉素的MSR‑1磁小体复合物及其制备方法，以具有天然脂质双分子膜层的MSR‑1磁小体为载体材料，利用正常组织、肿瘤微环境和溶酶体pH值的差异，采用pH敏感性腙键合成DOX‑PEI聚合物，再通过静电作用结合BMs和核酸，构建一种pH敏感的共载siRNA和阿霉素的MSR‑1磁小体复合物。该共载复合物进入生物体后，由于EPR效应会在肿瘤组织富集，促进细胞摄取，溶酶体的酸性环境诱发腙键断裂，DOX释放，而PEI的质子海绵效应使得siRNA和DOX安全释放进入细胞质，siRNA进一步发挥基因沉默效应的同时，DOX插入DNA片段中，起到协同治疗作用，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医用药物载体技术领域，具体涉及一种基于SANH的共载siRNA和阿霉素的MSR-1磁小体复合物及其制备方法。

背景技术

近年来，为了更有效的治疗癌症，共载基因和抗癌药物进行肿瘤联合治疗，被证明可实现不同治疗机制的药物的协同作用，比单独治疗更有效。主要优势在于：首先，化疗与基因联合治疗能降低肿瘤细胞变异的可能性，延缓药物多药耐药症状的发生；其次，共载基因和化疗药物用于肿瘤治疗时，一方面基因可以抑制相关靶基因的表达，可提高胞内化疗药物的浓度或诱导细胞凋亡，另一方面在达到协同增效作用时，减少了药物的使用剂量并降低了毒副作用；最后，共载体系可以将基因和抗癌药物两种具有不同药代动力学的物质同时递送至一个细胞内。一个理想的共载系统，结合化疗药物的部分与基因应能起到良好的协同治疗作用，还应具备控制释放的特性。

磁小体(bacterial magnetosomes，BMs)是由趋磁细菌合成的、呈现生物核壳式结构、以无机纳米粒为核心外部包被着磷脂双层膜的天然纳米颗粒，它具备磁性纳米药物载体的性质，并拥有一系列人工合成磁性纳米颗粒没有的特性，在疾病治疗方面表现出极大的应用潜力。不同的趋磁细菌合成的磁小体在数目、形状及表面积等方面不尽相同，具备种属特异性。

目前，共载基因和化疗药物递送系统均能发挥良好的协同治疗作用，为了满足共载用药的需求，我们需要对载体进行不断的开发及优化。磁小体凭借其超顺磁性、表面易修饰及生物膜包被等优势，有望成为共载基因和化疗药物的新型载体。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种基于SANH的共载siRNA和阿霉素的MSR-1磁小体复合物及其制备方法，以具有天然脂质双分子膜层的MSR-1磁小体为载体基体材料，利用正常组织、肿瘤微环境和溶酶体pH值的差异，采用pH敏感性腙键合成DOX-PEI聚合物，再通过静电作用结合BMs和siRNA，构建得到一种pH敏感的共载siRNA和阿霉素的MSR-1磁小体复合物。该共载复合物进入生物体后，由于EPR效应(实体瘤组织的高通透性和滞留效应)会在肿瘤组织富集，促进细胞摄取，溶酶体的酸性环境诱发腙键断裂，DOX释放；而PEI的质子海绵效应使得siRNA和DOX安全释放进入细胞质，进一步siRNA发挥基因沉默效应的同时，阿霉素插入DNA片段中，起到协同治疗作用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一种基于SANH的共载siRNA和阿霉素的MSR-1磁小体复合物的制备方法，包括：

1)将浓度为18～22mg/mL的SANH储备液和PEI按照质量比1:4～6的比例共同加入到pH 7.3～7.5的修饰缓冲液中，室温下在氮气保护下反应46～50h；将反应得到的产物放入截留分子量为8000～14000的透析袋中透析46～50h，保留液冷冻干燥，得到SANH-PEI；

2)将DOX·HCl和步骤1)得到的SANH-PEI按照质量比1:3～5的比例共同溶解在pH5.9～6.1的连接缓冲液中，室温下在氮气保护下避光反应46～50h；将反应得到的产物放入截留分子量为8000～14000的透析袋中透析46～50h，保留液冷冻干燥，得到DOX-PEI；