[发明专利]一株微白黄链霉菌Z9及其在防治向日葵菌核病的应用

说明书

本发明公开了一株防治向日葵苗期菌核病的微白黄链霉菌Z9，所述菌种的保藏号为CGMCC 13115，属于微生物技术领域。通过实施向日葵菌核病的病原菌核盘菌的分离活化和鉴定、拮抗菌的初筛和复筛实验以及拮抗菌的菌种鉴定分析等实验，表明菌株Z9具有较强的抑制核盘菌菌丝生长的能力。本发明的菌株Z9发酵原菌液处理过的向日葵种子皮壳侵染发病率降低了70％、菌株Z9发酵滤液对种子萌发促进率为33.3％、菌株Z9发酵原菌液的离体叶片防治效果为69.6％、菌株Z9发酵原菌液盆栽实验防治效果为66.7％，能有效抑制核盘菌的生长繁殖。本发明的菌株培养条件简单，易保存，对环境友好，具有良好的开发应用价值。

技术领域

本发明涉及一株微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)Z9及其在防治向日葵菌核病的应用，更确切地说涉及到该菌株在向日葵苗期生长过程中菌核病防治的应用，属于微生物技术领域。

背景技术

向日葵菌核病是向日葵最重要的病害之一，在世界各国均有发生，其病原菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)致病性强，可以穿透寄主植物表皮，杀死细胞，进而侵染向日葵的根、茎、叶和花盘等多个部位，甚至造成植株整体或局部腐烂死亡，若管理不当，会对向日葵产量造成极大损失。近年来，向日葵菌核病的普遍发生和严重危害极大地影响了向日葵种植业的稳步发展。

向日葵菌核病的致病菌即核盘菌是为土壤习居菌，能在土壤中长期存活和积累，其生活史中有90％的时间是以菌核的形式长期存活于土壤中。菌核可在土壤表层或混入种子间休眠，其生命力很强，在干旱的土壤中可存活6-8年，在潮湿的土壤中可存活3-5年。核盘菌菌丝生长的最适温度范围在20-28℃，最适 pH值4-7，最佳碳源、氮源分别为甘露糖及天门冬酰胺，菌丝生长对缺Cu、Fe 最为敏感，菌丝可在PDA、PSA等天然、半天然培养基上生长旺盛且均匀。菌丝在45℃处理10min，菌核在50℃处理10min，均不再存活。

在防治方面，由于向日葵菌核病的抗病育种进展缓慢，目前还没有抗病品种和高效耐病品种。化学防治主要使用的有多菌灵、速克灵和菌核净等药剂，但向日葵植株过于高大，田间用药十分困难，药剂对土壤中菌核效果有限且易对环境造成污染等影响，因此防治效果并不理想。在农业防治方面，也缺少经济实用并且效果显著的方法。因此，筛选利用有益微生物及其代谢产物来防治向日葵菌核病是实施绿色环保安全的具体措施。

发明内容

本发明的目的在于提供一株能够很好地控制向日葵菌核病病害发生的生防菌株及其初步应用。

本发明从青海祁连县采集土壤样品，通过稀释涂布平板法在高氏一号、TSA、 LB、ISP2和PDA培养基上获得不同菌株的单菌落，将单菌落纯化扩大培养；再采用平板对峙实验初步筛选出对向日葵核盘菌有明显抑制效果的拮抗菌株，对其进行16S rRNA基因序列测序确定其所属种属，该菌株对人畜均无致病致癌性，能安全地用于向日葵菌核病的生物防治中。

本发明所提供的技术方案是一株微白黄链霉菌Z9及其在防治向日葵菌核病 的应用，根据对其形态学特征观察和16S rRNA基因序列分析，确定该菌株为微 白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)，命名为微白黄链霉菌Z9(Streptomyces albidoflavusZ9)。该菌株于2017年4月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：13115，保藏单位地址为：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号。

菌株Z9能在高氏一号、ISP2、LB、TSA和PDA等不同培养基上生长。菌株Z9在高氏一号培养基上生长时，气丝初为肉色，后变为灰色；在ISP2培养基上生长时基内菌丝呈肉粉白色，菌落较干燥，边缘褶皱；在LB培养基上生长时，基内菌丝呈肉色，菌落较透明；在TSA培养基上生长时，菌落呈白色，基内菌丝呈粉白色，边缘褶皱；在PDA培养基上生长时，气丝灰色，呈粉状，基丝初黄色，后变为棕色。