[发明专利]一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的高特异性microRNA荧光检测方法

权利要求书

1.一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的microRNA荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将目标microRNA序列划分为两段，3'端段和5'端段，两段的碱基数均不低于8bp，设计探针P1使其能够检测3'端段或5'端段；探针P1碱基数不低于8bp，且不超过3'端段或5'端段的碱基数；

2）用探针P1对待测样品进行双链特异性核酸内切酶介导的microRNA荧光检测，得荧光值F1，若与探针P1互补配对的序列仅存在目标microRNA中，根据检测所得荧光值F1计算microRNA含量，即为目标microRNA的含量；

3）若与探针P1互补配对的序列还存在于其他非目标microRNA中，根据探针P1计算所得的microRNA含量记为C1；同时再设计特异性检测该非目标microRNA的探针P2，P2的碱基数不低于8bp且不高于12 bp；

4）用探针P2对待测样品进行双链特异性核酸内切酶介导的microRNA荧光检测，得荧光值F2，根据荧光值F2计算得microRNA含量C2，C1减去C2的差值即为目标microRNA的含量；

其中，所述探针P1，P2为DNA探针；

所述方法不用于疾病的诊断或治疗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，双链特异性核酸内切酶介导的microRNA荧光检测的反应温度为35~37℃。