[发明专利]一种缓解眼干症状的菊花有效成分的研究方法

说明书

本发明涉及一种菊花有效成分的研究方法，尤其是一种缓解眼干症状的菊花有效成分的研究。采用色谱、波普等技术对明钼菊样品进行定性、定量分析，采用采用原子荧光、原子吸收、或ICP‑MS(电感耦合等离子体质谱)等方法测定明钼菊的钼含量，通过建立蓝光诱导HRPE细胞(人视网膜色素上皮细胞)的光损伤体外药效评价模型进行药效活性跟踪，观察明钼菊提取物、单体化合物对光损伤HRPE细胞氧化应激状态的影响，评估明钼菊对眼干症状的缓解作用。

技术领域

本发明涉及一种菊花有效成分的研究方法，尤其是一种缓解眼干症状的菊花有效成分的研究。

背景技术

菊花是菊科植物。菊花Chrysanthemum morifolium Ramat鳞托菊的干燥头状花序，是中国常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒之功效。主要治疗风热感冒、头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒等症。现代药理研究表明，菊花具有治疗冠心病、降低血压、预防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多种药理活性。《神农本草经》记载：白菊花“主诸风头眩、肿痛、目欲脱、皮肤死肌、恶风湿痹，久服利气”《本草纲目》中也有记载菊花“性甘、味寒，具有散风热、平肝明目之功效”。现代药理分析表明，菊花里含有丰富的维生素A和绿原酸，是维护眼睛健康的重要物质。

由于社会发展，电视、电脑进入每家每户，社会压力增大，致使肝火旺盛，用眼过度导致双眼干涩，菊花茶有效明目，缓解眼干涩疲劳。随着电脑成为一种必备的办公工具，辐射严重，眼部干涩疲劳，是都市人的通病。

菊花因产地和品种不同，其化学成分有一定的差异。目前对药典收载的四种来源的菊花的化学成分研究均有报道。研究发现，菊花的化学成分比较复杂，其中黄酮类化合物、三萜类化合物和挥发油是其主要有效成分。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种缓解眼干症状的菊花有效成分的研究方法，其重点在于，研究菊花有效成分的缓解眼干作用的效果。其他还包括，菊花物质基础和有效成分单体化合物的前提研究。

采用HPLC-DAD，MS等技术对不同来源明钼菊样品进行定性、定量分析，建立明钼菊道地性特征图谱。

采用采用原子荧光、原子吸收、或ICP-MS(电感耦合等离子体质谱)等方法测定不同来源明钼菊的钼含量，确定明钼菊钼含量质量控制技术要求。

采用色谱、波普等技术对菊花的化学成分进行分离机结构鉴定，确定明钼菊的药效物质基础，为本品药效活性及其质量研究提供单体化合物。

采用蓝光诱导HRPE细胞(人视网膜色素上皮细胞)的光损伤体外药效评价模型进行药效活性跟踪，观察明钼菊提取物、单体化合物对光损伤HRPE细胞氧化应激状态的影响，检测细胞存活率、凋亡率，分析细胞核形态，观察受试药物对细胞凋亡等方面的调控作用。评估明钼菊对眼干症状的缓解作用。

具体实施方式

采用色谱、波普等技术对菊花的化学成分进行分离机结构鉴定，并确定明钼菊的药效物质基础，提供单体化合物用于研究。

用相同光照强度的蓝光照射体外培养相同细胞培养终止时间的人RPE细胞相同时间，分为3组，A组：体外培养的人RPE细胞的营养液中含有明钼菊提取液；B组：体外培养的人RPE细胞的营养液含有从明钼菊分离出的单体化合物液体；C组：体外培养的人RPE细胞的营养液中不含有上述物质。利用末端脱氧核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)、荧光素标记的连接素V/碘化吡啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞检测、透射电子显微镜等手段观察细胞凋亡。统计细胞存活率和凋亡率：