[发明专利]基于响应面法优化提取的川白芷多糖及制备方法和应用

权利要求书

1.川白芷多糖在制备具有抑菌作用的日化用品、食品、保健品或药品中的用途，其特征在于：所述川白芷多糖为具有酰基或O-乙酰基的α-呋喃糖型氨基多糖，其表观分子量为1.17kDa，由川白芷药材经水提醇沉、去蛋白去盐后，再经DEAE-琼脂糖凝胶FF柱和琼脂糖凝胶6FF凝胶柱层析分离而得；所述水提条件为81℃浸提3次，每次浸提1h，所述水与川白芷粉末的用量比为68mL/g；

所述川白芷多糖的制备方法具体包括以下步骤：

A：脱脂脱色素：将川白芷药材洗净烘干粉碎，得粉末；将所述粉末先加入石油醚脱脂后，再加入高浓度乙醇溶液脱除部分色素及低聚糖；

B：提取：将脱脂脱色素后的粉末加水于81℃浸提3次，每次浸提1h，所述水与川白芷粉末的用量比为68mL/g，合并提取液，过滤，滤液浓缩，得浓缩液；

C：醇沉除杂：将所述浓缩液醇沉除去水溶性杂质后得到川白芷粗多糖；

D：去蛋白：将所述川白芷粗多糖采用酶+Sevag结合法去除蛋白；

E：透析去盐：将所述去除蛋白后的川白芷粗多糖采用透析法去除无机盐和小分子物质，得去盐川白芷多糖；

F：将所述去盐川白芷多糖进行DEAE-琼脂糖凝胶FF柱层析，收集并合并第一个洗脱峰的收集液，浓缩，透析，冻干；

G：将步骤F冻干后的川白芷多糖进行琼脂糖凝胶6FF凝胶柱层析，收集并合并主峰的洗脱液，浓缩，透析，冻干，即得。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述步骤A中，将川白芷根洗净，于40-50℃烘干，粉碎，过40目筛，得川白芷粉末；取所述川白芷粉末加入石油醚加热回流脱脂4h，过滤，滤渣于40-50℃烘干后，再加入80％乙醇加热回流提取4h，过滤，滤渣挥干乙醇后粉碎，于40-50℃烘干，备用；所述石油醚的用量按每克川白芷粉末计为2-4mL，所述80％乙醇的用量按每克川白芷粉末计为2mL。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述步骤C中，向浓缩液中加入无水乙醇至混合溶液乙醇终浓度为50-70％，于0-6℃静置12-24h，离心，取离心沉淀加水溶解后，再次离心，取再次离心后的上清液，向所述上清液加入无水乙醇至混合溶液乙醇终浓度为50-70％，于0-6℃静置12-24h，第三次离心，取第三次离心后的沉淀，得川白芷粗多糖，备用。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述步骤D中去蛋白所用的酶为木瓜蛋白酶，所用Sevag试剂为氯仿:正丁醇＝4:1，所述去蛋白的次数为10次；所述步骤E中，采用截留分子量为8000-14000Da的透析袋，室温蒸馏水透析24h后，换干净蒸馏水再透析8h，重复2次。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述步骤F中，将川白芷多糖加水溶解后，上样于DEAE-琼脂糖凝胶FF柱，先以1.5倍柱体积的蒸馏水洗脱后，再以水和2mol/L的NaCl溶液混合洗脱，实现0～1.5mol/L NaCl溶液的梯度洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制苯酚-硫酸反应曲线图，并绘制反应曲线，根据所述反应曲线合并同一洗脱峰的收集液，浓缩，透析，冻干。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：将步骤F冻干后的川白芷多糖加水溶解后，上样于琼脂糖凝胶6FF凝胶柱，洗脱液为0.05mol/L NaCl溶液，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制苯酚-硫酸反应曲线图，采用考马斯亮蓝G250法测定蛋白含量，并绘制反应曲线，根据所述反应曲线收集主峰的洗脱液，浓缩，透析，冻干。