[发明专利]具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明根据鱼皮蛋白的特性，以鱼皮为原料，通过对鱼皮进行超声波和高温高压等预处理，利用多种蛋白酶分步酶解技术，通过膜分离、凝胶分离及高效液相色谱分离技术，所得鱼皮蛋白肽粉中序列如SEQ ID NO:1和2所示的鱼皮蛋白肽的含量占鱼皮蛋白肽粉总重的50％以上，建立了一套简单高效的鱼皮抗氧化蛋白肽制备方法。

技术领域

本发明涉及鱼类抗氧化物质及其制备方法和用途，具体地说，涉及一种具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法与应用。

背景技术

蛋白质经过酶解得到多肽，使其蛋白质的结构发生改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成，活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性终产物。抗氧化多肽的应用能防止食品成分由于捐献电子给活性氧自由基以及中和活性氧自由基的负面作用而变质。抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有着广泛的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法。

本发明的另一目的是提供所述鱼皮蛋白肽在医药、食品及保健品中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供的具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。

含有上述鱼皮蛋白肽的鱼皮蛋白肽粉可按照如下方法制备，包括以下步骤：

(1)将冷冻鱼皮在8-12℃条件下进行解冻清洗，鱼皮清洗后用打浆机将鱼皮打成浆，加入鱼皮重量1.5-2.5倍的水，于120-130℃保温30-60分钟；

(2)将鱼皮蛋白浆的温度下调至60-70℃，进行超声处理(超声处理旨在改变鱼皮蛋白的组织结构)；超声处理在超声波发生器内进行，超声波的频率为50-60kH，处理时间25-35分钟；

(3)将经过超声后鱼皮蛋白浆的温度上调至115-125℃，于115-125℃煮制90-150分钟，然后离心取上清液；

(4)按照鱼皮重量0.15-0.30％的比例向(3)的上清液中加入复合蛋白酶进行分步酶解：第一步向上清液中加入鱼皮重量0.10-0.15％的复合蛋白酶I(由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按质量比1-2:1组成，其中碱性蛋白酶的酶活为70-100万U/g，胰蛋白酶的酶活为40-60万U/g)，于50-55℃酶解0.5-1.0h；第二步向上述酶解体系中加入鱼皮重量0.05-0.15％的复合蛋白酶II(由木瓜蛋白酶和风味蛋白酶按质量比1-2:1组成，其中木瓜蛋白酶的酶活为30-60万U/g，风味蛋白酶的酶活为50-90万U/g)，于50-60℃酶解0.5-1.0h；然后在95-98℃下保温10-20分钟，冷却至室温，用活性炭过滤，收集上清液；

(5)对步骤(4)所得上清液进行超滤处理，先用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的滤膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来；

(6)分子量小于3000的蛋白肽液再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第1个洗脱峰，再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，取第7-9分钟收集的肽溶液；

(7)将步骤(6)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼皮蛋白肽粉。