[发明专利]一种腐烂茎线虫离体培养方法

权利要求书

1.一种腐烂茎线虫离体培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，培养基上培养镰刀菌（Fusarium spp.），待其长出菌丝体后；第二步，将腐烂茎线虫培养于所述长有菌丝的培养基中。

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，第一步所述培养基为蔗糖琼脂（PDA）培养基。

3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，其中第二步所述线虫制备成悬浮液后再养于所述长有菌丝的培养基中。

4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，其中第一步所述培养镰刀菌是在培养皿上进行，待菌丝长汇培养皿后，用于培养所述线虫。

5.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，第二步中将线虫悬浮液均匀地分布于长满菌丝的培养基中，将培养容器用封口膜封好，将正置于25℃下暗培养。

6.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述接种量为1000条/皿，培养皿直径90mm。

7.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，正置培养2～4d后将培养皿盖朝下放置，继续培养25-35后，即可收集到大量的线虫。

8.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，第二步中，所述线虫从病薯中分离。

9.如权利要求8所述的培养方法，其特征在于，第二步中，线虫悬浮液的具体制备方法如下：在漏斗上连一乳胶管，乳胶管的另一头连一指形管，将漏斗放在漏斗架上，漏斗内放一铁丝网，网上铺两层餐巾纸；将采集到的病薯用自来水冲洗干净，用刀切小块，轻轻放在纸上，从餐巾纸背面加入适量无菌水，使水漫过病害组织；24 h后取下指型管，静置1-2min后，弃去上层水；然后用玻璃吸管将分离到的线虫转移至2 mL离心管中；加入35%的蔗糖溶液后，以3000 r/min离心2 min；取表层线虫悬浮液，转移至无菌水中，以3000 r/min离心2 min，弃上清液；然后用0.5%次氯酸钠消毒2 min后，移入0.5%青霉素和0.5%硫酸链霉素混合液中消毒10 min，离心后吸出消毒液，用无菌水冲洗3遍后4℃保存备用。