[发明专利]食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用

权利要求书

1.一种食用菌凝集素抑制棕囊藻生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：取双孢蘑菇2796子实体，按质量体积比为1:5加入0.9%w/v生理盐水，在4℃下浸泡18h；然后用高速组织捣碎机将其均浆后再次放在4℃下浸泡4h，4层纱布过滤，弃滤渣，取滤液；在4℃，9000 r/min下冷冻离心20min，取出上清液；加入22.6%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为40%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，取上清；再次在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出上清液，加入12%w/v硫酸铵盐析，并用79-1 磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为60%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出沉淀；将沉淀溶于1mol/l的NaCl中，装入透析袋中除盐，用相同的盐浓度透析至外透析液无SO₄^2-检出为止；所得透析液聚乙二醇浓缩后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱，以0.05mol/l，pH7.8的磷酸缓冲液PBS对含1mol/LNaCl 的同一缓冲液梯度洗脱，检测波长280nm，分管收集，以鸽子血检测各峰的凝血活性，收集活性峰；然后活性峰上Sephadex G-100柱层析纯化，流速4ml/管，10min/管，洗脱液为 0.05 mol/l、pH8.0的PBS缓冲液，检测波长280nm，分管收集后检测各峰的凝血活性，收集活性峰，冷冻干燥即得所述食用菌凝集素纯品；

步骤2：将步骤1得到的食用菌凝集素纯品直接加入棕囊藻生长水域中，抑制其生长。