[发明专利]HIV疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于疫苗领域，涉及一种基于构象诱导加特异性表位加强免疫策略的艾滋病组合疫苗以及其制备方法。更具体地，本发明涉及一种艾滋病组合疫苗，其包括联合使用的DNA疫苗、包膜蛋白疫苗和特异性位点的多肽疫苗。该组合疫苗可诱导识别与抗病毒保护率相关的天然抗原的IgG抗体产生增强，而与该IgG竞争的IgA水平下降，并使杀伤感染靶细胞的ADCC效应有显著提高，从而达到优异的预防艾滋病的效果。

技术领域

本发明属于疫苗领域，具体涉及一种基于构象诱导加特异性表位选择加强免疫策略的新型艾滋病疫苗以及其制备方法。

背景技术

艾滋病(AIDS)是由感染人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起人淋巴CD4T细胞大量死亡而导致的获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiency syndrome，AIDS)。1981年发现首例艾滋病病例后，艾滋病迅速在全球范围内蔓延扩散。根据联合国艾滋病规划署的估计，截至2015年底，全球仍有约3670万艾滋病毒感染者。同年，约200万人新感染了艾滋病毒，120万人死于艾滋病毒相关原因，已经严重威胁全球的人类健康，严重危害社会进步和经济增长，是全球所面临的重大挑战之一。如何有效预防HIV感染，降低发病率和死亡率是我国乃至全球面临的紧迫任务。

疫苗是控制HIV传播和感染的有效手段。遗憾的是，目前尚无有效的疫苗被批准上市。RV144是目前唯一一个在临床试验上证明具有一定保护效果的疫苗，临床试验表明其有31.2％的保护效果(3)。随后的免疫分析发现其具有保护效果的原因(4)主要为：1)抗HIV保护率与疫苗接受者体内识别HIV包膜蛋白gp120 V1V2区的IgG抗体含量水平成正相关；2)抗HIV保护率与疫苗接受者体内血浆中识别HIV包膜蛋白IgA的水平成负相关。血浆中该类IgA可能跟该类IgG竞争结合包膜蛋白，从而阻止该类IgG发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)，降低对HIV感染细胞的杀伤作用而削弱疫苗的保护效果。并且，针对V1V2区的IgG所具有的ADCC效应被认为与RV144具有保护效果密切相关，可能起到了关键作用。因此，如何诱导出更高水平的识别HIV-1天然构象V1V2的特异性IgG及该IgG介导的ADCC能力、同时减少刺激产生识别包膜蛋白的IgA，是HIV疫苗设计的关键技术瓶颈之一。

之前的研究表明，利用假病毒去免疫动物，免疫得到的抗体既能够识别病毒包膜蛋白也能够识别含有某一表位序列的多肽。但是，用含有某一表位序列的多肽作为抗原免疫动物所得到的抗体仅能识别该多肽抗原，而极难识别具有天然构象的病毒包膜蛋白(图1)。因此，单纯利用多肽免疫很难诱导产生识别结合天然构象病毒包膜蛋白的抗体，这是目前HIV疫苗研究中的共识。造成这一现象的原因可能是相同序列在多肽上的构象与在病毒上的天然构象不同。

目前这种以多肽为抗原的表位疫苗设计方案面临以下几个重要问题：1)表位多肽分子量相对小，免疫原性较弱；2)由于多肽抗原只包含关键表位的氨基酸序列，没有较多的周围辅助结构，所以很难具有类似于病毒上该表位的天然构象，因此有些多肽抗原很难诱导出能够识别具有天然构象相应表位的抗体。例如，之前的研究表明，利用HIV-1 gp41上MPER区的表位多肽，诱导产生的抗体仅能够识别该表位多肽，而对HIV的识别能力较差，没有中和活性(1,2)。因此，如何利用表位疫苗诱导出识别病毒上具有天然构象的相应表位的抗体是HIV疫苗设计的一个难题。

发明内容

针对以上两个技术难点，我们在本发明中创新地提出了构象诱导加特异表位筛选的方法，来解决现有的HIV疫苗所存在的保护效果不高的问题。本发明提出的构象诱导加特异表位选择加强免疫的设计能够有效地解决利用线性表位疫苗难以诱导识别具有天然构象的该表位的抗体的难题，增强疫苗的抗病毒保护效果。

因此，一方面，本发明涉及一种艾滋病组合疫苗，其包含按以下顺序分别接种的组分：