[发明专利]髓核细胞源性活性微载体的构建

权利要求书

1.一种髓核细胞源性活性微载体构建方法，其特征在于，具体构建方法如下：

（1）髓核细胞微球制备

取SD大鼠髓核细胞，使用F12培养基扩增至第3代，取4×10^⁵个髓核细胞使用1mL F12培养基重悬，并置于15mL离心管，通过离心富集法在1000rpm下离心5分钟，在F12培养基中静置24h，利用髓核细胞自卷曲能力获得髓核细胞微球；

（2）髓核细胞微球基质合成

更换髓核细胞微球的培养环境：在DMEM高糖培养基中添加10ng/mL的TGF-β3，10%胎牛血清，50nM维生素C，于37℃，5%CO₂的环境中培养12天，每3天换一次液，促进髓核细胞微球中基质产生和沉积；

（3）获得髓核细胞源性活性微载体

首先，联合使用脱细胞剂2% Triton-100和50mM的SB-10对培养后的髓核细胞微球进行脱细胞处理，37℃恒温摇床中以100转/分钟的速率处理1小时，在脱去髓核细胞后利用720mU/mL脱氧核糖核酸酶和720mU/mL核糖核酸酶对残留核酸成分进行灭活，最后使用磷酸盐缓冲液在先前摇床环境下对获得的微载体清洗3次，每次5分钟，从而获得一种由髓核细胞自身分泌的基质构成的髓核细胞源性活性微载体。

2.根据权利要求1所述的一种髓核细胞源性活性微载体构建方法，其特征在于，步骤（1）所述的F12培养基为：3151 mg/L D-葡萄糖，365mg/L L-谷氨酰胺，55mg/L丙酮酸钠，2438mg/L碳酸氢钠，100U/mL青霉素，100ug/mL链霉素，pH 7.0-7.4。

3.根据权利要求2所述的一种髓核细胞源性活性微载体构建方法，其特征在于，步骤（2）所述的DMEM高糖培养基为：4500mg/L D-葡萄糖，584mg/L L-谷氨酰胺，110mg/L丙酮酸钠，1.5g/L碳酸氢钠，100U/mL青霉素，100ug/mL链霉素，pH 7.0-7.2。

4.根据权利要求1所述方法构建的活性微载体在负载干细胞中的应用。