[发明专利]一种用于园林废弃物降解的复合微生物菌剂、制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备复合微生物菌剂的方法，其中，所述方法包括：

步骤(1)将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)和特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)四种菌种挑取单菌落分别接种于液体培养基中，30-37℃，130-150r/min培养24小时，将黄孢原毛平革菌接种于液体培养基中，28-30℃，130-150r/min培养48小时；

步骤(2)将所述步骤(1)中收获的所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌和特基拉芽孢杆菌分别以1％的接种量接种同一液体培养基中，在45℃，130-150r/min条件下再发酵24小时，将步骤(1)中收获的所述黄孢原毛平革菌以2％的接种量接种液体培养基中，在45℃，130-150r/min条件下再发酵24小时；

步骤(3)将所述步骤(2)中收获的所述四种细菌的混合培养物和收获的所述黄孢原毛平革菌培养物按照体积比1:1的比例混合得到所述复合菌液；

步骤(4)将载体灭菌；以及

步骤(5)将所述步骤(3)中混合好的所述复合菌液稀释，与所述灭菌的载体混合均匀，经固体发酵烘干后得到所述复合微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌CICC10088；所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌CICC10095；所述暹罗芽孢杆菌为暹罗芽孢杆菌BNCC210681和所述特基拉芽孢杆菌为特基拉芽孢杆菌CICC10832；所述黄孢原毛平革菌为黄孢原毛平革菌CICC40719。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(1)、所述步骤(2)中的液体培养基成分包括马铃薯20％，蔗糖1％，葡萄糖1％，胰蛋白胨0.3％，酵母浸粉0.3％，pH为6.8。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(1)中将所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌和特基拉芽孢杆菌四种菌种分别接种于液体培养基中，37℃，130r/min培养24小时，将所述黄孢原毛平革菌接种于液体培养基中，30℃，130r/min培养48小时；

所述步骤(2)中将所述步骤(1)中收获的所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌和特基拉芽孢杆菌分别以1％的接种量接种同一液体培养基中，在45℃，130r/min条件下再发酵24小时，将所述步骤(1)中收获的所述黄孢原毛平革菌以2％的接种量接种液体培养基中，在45℃，130r/min条件下再发酵24小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(4)中所述载体经粉碎后灭菌，所述灭菌条件为121℃灭菌20min，灭菌后的载体pH7.5，置于无菌环境冷却至40-50℃；

所述步骤(5)中所述复合菌液稀释倍数为10倍，稀释后的复合菌液置于45℃，130r/min条件下震荡30min后再与所述载体混合，所述固体发酵条件为45℃、发酵48小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(3)混合得到所述复合菌液之后，在进行所述国体发酵之前还包括复合菌液的发酵优化步骤：优化发酵条件为45℃，130r/min持续震荡，发酵培养60h。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述载体为木屑、麸皮或粉碎的园林废弃物，所述园林废弃物为收集来的树枝、落叶、草坪修剪物。

8.根据权利要求1～7所述的方法制备的复合微生物菌剂，其中，所述复合微生物菌剂由复合菌液和载体组成，所述复合菌液由枯草芽孢杆菌菌液、地衣芽孢杆菌菌液、暹罗芽孢杆菌菌液、特基拉芽孢杆菌菌液和黄孢原毛平革菌菌液组成，枯草芽孢杆菌菌液、地衣芽孢杆菌菌液、暹罗芽孢杆菌菌液、特基拉芽孢杆菌菌液与黄孢原毛平革菌菌液的体积比例为1:1:1:1:4。

9.根据权利要求8所述的复合微生物菌剂，其中，将所述复合菌液与灭菌的所述载体按照体积/重量比3:2混合均匀，然后经固体发酵烘干而成。