[发明专利]一种固相萃取‑液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法

权利要求书

1.一种固相萃取-液相色谱串联质谱法同时检测水体中9种雌激素类物质的方法，其特征在于，按以下步骤进行：

(1)水样预处理

采集一定体积水样，过滤除去细小颗粒状悬浮物，加酸调节水样pH至3-4，固相萃取前加入内标物指示回收率；

(2)固相萃取前处理：富集净化过程

先后用甲醇和纯水活化固相萃取小柱，将步骤(1)中处理过的水样过柱，富集；再用纯水和低浓度的甲醇水溶液淋洗，并在真空条件下抽干固相萃取小柱；之后，再用甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹至近干，得到残渣；将残渣用一定浓度的甲醇重新溶解，定容，经超声、过滤后转移至进样瓶中，待测；

(3)液相色谱串联质谱法测定9种雌激素类物质的含量

采用内标法，在液相色谱-串联质谱仪上，定量检测水体中9种雌激素类物质的含量；所述的9种雌激素类物质分别是：雌酮、17α-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚、双酚A、壬基酚和辛基酚。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，固相萃取前分别加入17β-雌二醇-d3、己烯雌酚-D8、4n-壬基酚-D8这三种内标物指示回收率。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，固相萃取前分别加入100ng/L的17β-雌二醇-d3、己烯雌酚-D8、4n-壬基酚-D8这三种内标物指示回收率。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采集水样的体积：自来水和河水分别为1L；而畜禽场污水为0.1L，离心去除大颗粒悬浮物后，用Mliil-Q超纯水稀释到1L；过滤水样使用的过滤膜为Whatman GF/F系列孔径为0.45um的玻璃纤维滤膜；使用稀盐酸调节水样pH至3-4。

5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所用的固相萃取柱为Oasis HLB小柱，它是一种亲水-亲脂性聚合物填料柱；活化固相萃取柱所用的甲醇和水用量各为萃取柱体积的1倍。

6.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，水样过柱流速为3-6mL/min；淋洗萃取柱所用的纯水和低浓度甲醇水溶液用量各为萃取柱体积的1-2倍；淋洗所用的低浓度甲醇为体积浓度小于10％的甲醇水溶液；淋洗后的抽干时间为15-30min；洗脱所用的甲醇为HPLC级甲醇；洗脱萃取柱所用的甲醇用量为萃取柱体积的2倍。

7.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，淋洗所用的低浓度甲醇是体积浓度为5％的甲醇水溶液；得到的残渣用甲醇-水体积比为7:3的甲醇水溶液重新溶解，定容到1mL，超声10-15min，用孔径在0.22um以下的滤膜过滤，待进样测定。

8.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，选用美国AB公司的AB5500Q-trap高效液相色谱串联质谱仪，配岛津30A液相色谱对9种目标雌激素类物质进行检测；色谱柱选用Shim-Pack XR-ODSII C18柱型号100mm×2mm，1.0μm；流动相A为Milli-Q超纯水，流动相B为乙腈。

9.根据权利要求1、2或3所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，液相色谱分离参数为：色谱柱柱温40℃；进样量5μL；进样室温度10℃；流动相流速0.3mL·min^-1；流动相A为Milli-Q超纯水，B为乙腈；梯度洗脱程序：0-3.0min，30％B；3.0-4.0min，30％B-90％B；4.0-7.0min，90％B；7.0-8.0min，90％B-30％B；8.0-10.0min，30％B。

10.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱检测条件为：采用电喷雾离子源负离子模式ESI-，三重四级杆质量分析器，扫描方式：多反应监测模式MRM进行检测；离子源温度为550℃，离子化电压为-4500V，气帘气CUR为35psi，喷雾气GS1为50psi，辅助加热气GS2为50psi，碰撞气CAD为Medium，碰撞气为高纯氮气。