[发明专利]一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法在审
| 申请号： | 201710435605.7 | 申请日： | 2017-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN109022511A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 吴浪 | 申请（专利权）人： | 吴浪 |
| 主分类号： | C12P17/06 | 分类号： | C12P17/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 725000 陕西省安康市汉滨区*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 茶黄素 酶促合成 茶多酚氧化酶 同工酶 分离纯化 大规模工业化生产 多酚氧化酶 理论和实践 反应底物 工艺技术 工艺优化 技术瓶颈 酶促反应 无副产物 摇床振荡 茶多酚 粗酶液 儿茶素 缓冲液 高纯 酶源 萃取 制备 茶叶 浓缩 终端 安全 | ||
1.一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：该方法步骤如下：
1)以茶多酚溶液为底物，以茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶液为酶源，按1:500-800的体积比将茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶液加入到质量体积浓度为1.2％-3％的茶多酚溶液中；
2)以空气作为酶促合成的氧气来源，于20-44℃、60-150r/min摇床振荡下酶促反应30-60min，得酶促反应液；
3)于上述酶促反应液中，加入等体积的分析纯乙酸乙酯，静置萃取5-30min，离心取乙酸乙酯层溶液，对无机相溶液重复萃取及离心一次，合并乙酸乙酯层溶液，真空浓缩回收乙酸乙酯，冷冻干燥，即可。
2.如权利要求1所述的一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：所述步骤1)中的1.2％-3％质量体积比浓度的茶多酚溶液是将茶多酚溶解于pH值为4.5-6.5的缓冲液中配制而成。
3.如权利要求1所述的一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液、醋酸钠-醋酸缓冲液或柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。
4.如权利要求1所述的一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：所述步骤3)中离心时间为1-5min，转速为500-3000r/min。
5.如权利要求1所述的一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：所述步骤3)真空浓缩的真空度为-0.05～-0.09Mpa，温度为50-60℃。
6.如权利要求1所述的一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：所述步骤3)中冷冻干燥时的真空度为-0.05～-0.09Mpa，温度为-38～-42℃。
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