[发明专利]优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法

说明书

本发明涉及一种优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法，包括以下步骤：（1）将鸭肝切碎后加入生理盐水，高速匀浆，再加入蒸馏水，升温搅拌处理，过滤得到脱脂鸭肝蛋白；将脱脂鸭肝蛋白挥发，冷冻干燥得到冻干粉；（2）将冻干粉加入蒸馏水中进行超声；然后加入胰蛋白酶，在水浴锅中酶解，离心过滤取上清液；（3）将上清液超滤处理，收集超滤液；将超滤液冷冻干燥，得到鸭肝多肽干燥粉末。该方法操作简单，处理时间短、多肽得率高，能耗较低及酶解物具有较好的清除自由基能力等优点。

技术领域

本发明涉及一种制备抗氧化肽的方法，尤其是一种优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法。

背景技术

我国是农业大国，畜禽产品资源非常丰富，在农产品总量中占有相当大的比重。鸭肝为鸭肉加工过程的副产物，其维生素、矿物质含量丰富，尤其是天然优质的完全蛋白的良好来源。但大部分鸭肝都以零售的形式销售到饭店供少部分顾客使用或废弃，许多活性物质没有得到充分利用。目前，开发天然抗氧化保健食品和天然抗氧化剂成为现代生命的科学热点，评价和筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为食品科学的新趋势。目前亟需以鸭肝为研究对象，进行鸭肝多肽的制备及抗氧化活性的研究，为开发天然抗氧化保健食品和食品中添加的天然抗氧化剂提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法，该方法操作简单，处理时间短、多肽得率高，能耗较低及酶解物具有较好的清除自由基能力等优点。

按照本发明提供的技术方案，所述优化脱脂方式联合超声辅助酶解鸭肝制备抗氧化肽的方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)将鸭肝切碎后加入鸭肝重量1～3倍的生理盐水，8000～12000rpm下高速匀浆1～3min，再加入鸭肝重量1～3倍的蒸馏水，升温至65～75℃，在200～400rpm下搅拌处理1～3h，过滤得到脱脂鸭肝蛋白；将脱脂鸭肝蛋白挥发1～3h，在-40～-50℃下冷冻干燥12～24h，得到冻干粉；

(2)将冻干粉加入冻干粉重量20～30倍的蒸馏水中进行超声；然后加入占冻干粉重量0.5％～1.5％的胰蛋白酶，在45～55℃水浴锅中酶解并在200～400rpm下搅拌90～150min后，在90～100℃水浴中灭酶10～20min；用盐酸滴定pH至中性，于8000～12000rpm、4～8℃条件下离心10～20min，过滤取上清液；

(3)将上清液超滤处理，收集超滤液；将超滤液冷冻干燥，得到鸭肝多肽干燥粉末。

在一个具体实施方式中，所述步骤(1)中过滤得到脱脂鸭肝蛋白后，再向鸭肝中加入鸭肝重量1～3倍的蒸馏水，升温至65～75℃，在200～400rpm下搅拌处理1～3h，过滤，将过滤得到脱脂鸭肝蛋白与步骤(1)中的脱脂鸭肝蛋白混合。

在一个具体实施方式中，所述步骤(2)中超声条件为超声功率：150～250W，超声时间：3～5min，工作时间2s，停歇时间3～5s，超声频率是20kHz。

在一个具体实施方式中，所述上清液中鸭肝多肽浓度在5.3～6.6mg/mL。

在一个具体实施方式中，所述步骤(3)中超滤处理是在过滤精度3kD～5kD的纤维膜中进行。

在一个具体实施方式中，所述步骤(3)中超滤液冷冻干燥是将超滤液在-70～-80℃下预冻6～12h，然后在大气压力为10～100Pa、温度为-55～-70℃条件下冷冻干燥24～72h。

本发明采用常压蒸煮脱脂能够很好地脱除鸭肝内的脂肪，有利于后续鸭肝产品的加工，是一种操作方便的鸭肝脱脂方式，且有利于鸭肝蛋白水解，节约加工成本，减少试剂对环境的污染；进一步联合超声辅助酶解，操作简单，处理时间短、多肽得率高，能耗较低及酶解物具有较好的清除自由基能力等优点。

附图说明