[发明专利]一种海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法

权利要求书

1.一种海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于包括以下步骤：

(a)外植体前处理：采集海南三七的根茎用自来水清洗干净，剪掉根茎上的贮藏根和须根后，消毒后晾干；再放入洗净消毒的河沙中，恒温发芽，洗净根茎芽，取其芽基部为外植体材料；

(b)丛生芽诱导：将消毒好的外植体接种到诱导培养基上培养，直至外植体基部形成丛生芽；所述的诱导培养基成分为MS、6‐苄氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；

(c)增殖继代：当初代芽基部丛生芽长至4～6cm时，切下芽，截取芽基部1.0‐1.5cm接种到增殖培养基中诱导丛生芽；所述增殖继代培养基成分为MS、6‐苄氨基腺嘌呤3.0～8.0mg/L、萘乙酸0.05～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；

(d)生根培养：当继代苗高4～7cm时，切下接种到生根培养基中，所述生根培养基成分为MS、萘乙酸0.10～0.50mg/L、香蕉泥10.0～15.0％、活性炭1.0～1.5g/L、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；

(e)炼苗移栽：当生根培养基上的苗高5～8cm时，在温室自然光照下炼苗7～10d，取出瓶苗，洗净根部培养基，百菌清溶液消毒后，移栽到进口泥炭的基质中，保持通风透气，湿度在70～85％，温度在20～32℃，自然光照条件培养后得移栽苗。

2.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于，步骤(a)所述的根茎芽的芽高为6‐18cm，有1片叶。

3.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于，步骤(a)所述的消毒后晾干的消毒是将海南三七的根茎放入质量浓度0.1‐0.3％的多菌灵粉剂溶液中浸泡消毒30‐40min。

4.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于，步骤(a)所述的恒温发芽是在培养箱中33℃恒温发芽下进行。

5.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于，步骤(a)所述的外植体为切掉海南三七根茎芽上的叶片和茎尖后留下的1～2cm的芽基部。

6.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于：以质量百分比浓度计，步骤b)所述外植体的消毒是先用0.1％‐0.3％高锰酸钾溶液浸泡根茎芽30～40min，再用0.1％～0.3％的百菌清溶液，浸泡根茎芽30～40min，接着在自来水下反复冲洗根茎芽30～40min；晾干表面水分后，在超净工作台上，切掉根茎芽上的叶片和茎尖，留2～3cm高的根茎芽基部，用棉球蘸取70％酒精擦拭芽基部，最后用0.1～0.2％升汞溶液消毒15‐18min，灭菌水冲洗4～5次，切掉距离芽基部两头各约0.3～0.5cm的部分，留1～2cm的芽基部，并将芽基部接种到诱导培养基中。

7.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于：步骤(e)中如果温度高于32℃，用风机和水帘降温。

8.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于：所述诱导培养基、增殖继代培养基和生根培养基的pH都为5.6～5.8；培养基灭菌条件为125℃，30～40min。

9.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于：步骤(b)、步骤(c)和步骤(d)所述培养的温度为25～30℃，光照强度为2000～2300lx，光照时间控制为14h/d。

10.根据权利要求1所述的海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于：步骤(e)所述百菌清溶液消毒是用0.1％～0.3％的百菌清溶液浸泡30～40min。