[发明专利]鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型双重PCR检测引物及试剂盒

说明书

本发明提供提供鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型双重PCR检测引物及试剂盒，属于动物传染病学领域。采用了如SEQ ID NO.1‑4所示的两对引物，建立能够对鸭群中鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型的进行鉴别诊断的双重PCR检测方法，为鸭群中开展腺病毒感染类型的流行病学调查及科学防控相关疾病奠定基础，具有十分重要的研究意义。

技术领域

本发明提供鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型双重PCR检测引物及试剂盒，属于动物传染病学领域。

背景技术

根据国际病毒分类委员会分类，腺病毒科（Adenoviridae）下设5个属，分别为富AT腺病毒属、禽腺病毒属、鱼腺病毒属、哺乳动物腺病毒属和唾液酸酶病毒属。腺病毒基因组全长约为33 kd，基因组为线性双链DNA；该类病毒颗粒为无囊膜的核衣壳呈二十面体对称，其中腺病毒的核衣壳有3个主要结构蛋白，分别为六邻体蛋白（Hexon）、纤维蛋白 (Fiber)和五邻体蛋白（Penton）。其中，Hexon蛋白是腺病毒科各属病毒最主要的结构蛋白，含有病毒主要的保护性抗原基因簇，与病毒的致病性密切相关。

鸭腺病毒2型（duck adenovirus 2，DAd V-2）是近年来利用病毒宏基因组学发现的一种鸭源新型腺病毒，该病主要发生在20～30日龄鸭中，以肝和脾肿大、出血为主要特征，死亡率约为7％。但是，核苷酸同源性分析比较发现，鸭腺病毒2型（GR株）和鸭腺病毒A型（duck adenovirus A，DAd V-A）分离株在Hexon基因的核苷酸同源性约为50.0%。通过对其基于Hexon蛋白的遗传进化分析发现，所有鸭腺病毒A型分离株在遗传进化上均处于相同的亚分支，且和绵羊腺病毒D型（OAV287株）均处于富AT腺病毒属遗传进化分支。但鸭腺病毒2型（GR株）和禽腺病毒A型Phelps株（鸡源）与P29株（鹅源）处于同一遗传进化分支，均属于禽腺病毒属遗传进化分支。

当前，在鸭群中存在2种腺病毒科但分属于不同腺病毒属的病原：鸭腺病毒2型（属于腺病毒科禽腺病毒属）和鸭腺病毒A型（属于腺病毒科富AT腺病毒属），但是，当前国内外尚未见可同时对鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型进行双重PCR检测方法的引物的研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。建立能够对鸭群中鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型的进行鉴别诊断的双重PCR检测方法，为鸭群中开展腺病毒感染类型的流行病学调查及科学防控相关疾病奠定基础，具有十分重要的研究意义。

发明内容

本发明的目的在于提供鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型双重PCR检测引物及试剂盒，建立能够对鸭群中鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型的进行鉴别诊断的双重PCR检测方法，为鸭群中开展腺病毒感染类型的流行病学调查及科学防控相关疾病奠定基础。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型双重PCR检测引物，所述引物如下：

针对鸭腺病毒2型的特异性引物：

DAd V-2 F2：5’-TGGCACTACAAGACAGAA-3’，

DAd V-2 R2：5’- AAGCACATTTCCTACTCCAA -3’，

目的片段大小为314bp；

针对鸭腺病毒A型的特异性引物：

DAd V-A F1：5’- TGTTGATAGCTATGATAAATTTGT -3’，

DAd V-A R1：5’- AAAGTACCACTCATAATTGTA -3’，

目的片段大小为580bp。

用于检测鸭腺病毒2型和鸭腺病毒A型的试剂盒，包括上述引物。