[发明专利]一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒

权利要求书

1.一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：Premix Ex Taq引物Mccp-specific-Forward和Mccp-specific-Revers，探针Mccp-specific-Probe，阴性对照和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述Premix ExTa引物为：

Mccp-specific-Forward：5′-GTAGCAGCTATATTCTTAATCA-3′

Mccp-specific-Reverse：5′-GCTACAAATAATTCTTGCATAC-3′。

3.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述探针为：

Mccp-specific-Probe：5′-F-AAGTAATACCAGCAGCAACAGCAAG-Q-3′其中，F为荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为TAMRA。

4.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为Nuclease-freewater；所述阳性对照为含有arcD基因序列的阳性标准质粒pMD18-T/arcD。

5.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述引物的扩增产物为185bp片段：GTAGCAGCTATATTCTTAATCAGCTCAATTTTATTAGCAATTGTTAACTCTTTAGGAGAAGAAAAATTTATTAAAGAATTTATGGCTGGTGCTTGCGATCTTTTAGGAGTATGTTTAGTTGAATATTAAAAGTAACGCGTATGCAAGAATTATTTGTAGC其中，带有下划线的序列为上下游引物，带有着重号的序列为探针的反向互补序列。

6.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述引物的浓度为10uM，探针的浓度为0.5uM，上、下游引物与探针的配比为1:1:2。

7.根据权利要求1所述的一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒的使用方法包括以下步骤：

步骤一、在iiPCR检测之前，打开POCKIT^TM核酸分析仪，仪器将在5分钟内完成自动校准，选择520nm波长，屏幕上显示“SystemREADY”；

步骤二、将山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒取45ul混合液加入到R-tube^TM，然后加入5ul模板DNA，将R-tube^TM盖上盖子后，用cubee^TM将管内液体离心至管底，R-tube^TM内所述试剂盒各成分的浓度和用量为：Premix Ex Taq 25ul，Mccp-specific-Forward 10uM1ul，Mccp-specific-Reverse 10uM 1ul，Mccp-specific-Probe 0.5uM 2ul，Nuclease-free water 16ul；

步骤三、将R-tube^TM放入到POCKIT^TM核酸分析仪的固定槽内，按压R-tube^TM确认放入正确位置；

步骤四、盖上POCKIT^TM核酸分析仪后，按“RUN”启动扩增程序，仪器将在42min内完成检测。