[发明专利]GLUT‑1在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用

说明书

技术领域

本发明属于葡萄糖转运体应用技术领域，具体涉及一种GLUT-1在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用。

背景技术

肥胖和2型糖尿病已经成为威胁人类健康的主要疾病，与其相关的新药研制一直是药物研发领域的热点。其中，蛋白类药物的开发表现出良好的前景。成纤维细胞生长因子21(FGF21)是机体肝脏细胞和脂肪细胞等分泌的活性蛋白，FGF21重组蛋白可降低血脂、降低血糖、减轻体重、显著减轻2型糖尿病的病症及其并发症。因此，FGF21成为多家研发公司竞相开发的一个候选药物。在药物研发中，建立一个稳定高效的药物效果检测体系是评价候选药物的关键，因此，建立一个客观评价FGF21重组蛋白治疗糖尿病效果的检测体系也是FGF21研发中的一个重要环节。

脂肪细胞是FGF21的靶细胞，FGF21调控脂肪细胞的分化与代谢等功能。脂肪细胞的葡萄糖摄取测定是目前普遍采用的FGF21活性检测方法：该方法在脂肪细胞培养液中加入葡萄糖的类似物2-脱氧葡萄糖，2-脱氧葡萄糖摄入细胞后被己糖激酶磷酸化为6-磷酸-2-脱氧葡萄糖，6-磷酸-2-脱氧葡萄糖因无法进入后续代谢而在细胞中聚集，通过检测6-磷酸-2-脱氧葡萄糖可反映细胞的葡萄糖摄入水平。该方法检测过程中一是使用放射性物质标记2-脱氧葡萄糖，对于实验防护和环境保护要求较高；另外，检测方法中使用荧光检测方法测定6-磷酸-2-脱氧葡萄糖的水平，该方法价格昂贵，不利于高通量筛选使用，同时该检测还受到己糖激酶活性的影响，在酶活性发生变化时不能很好地反映葡萄糖摄取能力变化。因此，研发新的FGF21功能检测的体系不仅可弥补葡萄糖摄取测定的不足，而且有望获得更为简便可靠的检测方法，这对于客观评价人重组FGF21蛋白效果具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种GLUT-1在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用，为判断人重组FGF21蛋白活性提供了新的思路，解决了现有检测方法成本昂贵、对环境要求高的问题。

本发明所采用的技术方案是，GLUT-1在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用。

本发明的特征在于，

GLUT-1与人重组FGF21蛋白的添加浓度关系为：GLUT-1基因表达水平随人重组FGF21蛋白的添加浓度的增加而增大。

GLUT-1的基因表达水平通过定量PCR方法检测。

定量PCR方法检测过程中，GLUT-1的引物序列为：

上游引物：5’-GCC CCC AGA AGG TTA TTG A-3’；

下游引物：5’-CG TGG TGA GTG TGG TGG AT-3’。

本发明所采用的另一个技术方案，用于判断人重组FGF21蛋白活性的GLUT-1，GLUT-1基因表达水平被人重组FGF21蛋白浓度上调，且呈剂量依赖性升高。

本发明的特征还在于，

GLUT-1为脂肪细胞内的GLUT-1。

本发明的应用有益效果是：本发明通过不同浓度的人重组FGF21蛋白处理脂肪细胞，采用定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测脂肪细胞内的葡萄糖转运体-1(GLUT-1)基因表达水平，从而确定脂肪细胞内葡萄糖转运体-1表达水平成为人重组FGF21蛋白活性检测的新指标，操作过程简单，对环境的要求低，有很好的实用价值。

附图说明

图1是本发明细胞转变为成熟脂肪细胞的显微图片；

图2是本发明定量PCR方法中葡萄糖转运体-1和beta-actin基因的扩增曲线图；

图3是本发明定量PCR方法中PCR产物的溶解曲线；

图4是本发明人重组FGF21蛋白处理细胞12h后对葡萄糖转运体-1基因表达的影响柱状图；

图5是本发明人重组FGF21蛋白浓度与葡萄糖转运体-1基因表达水平的量效关系图；

图6是人重组FGF21受体抑制剂对人重组FGF21蛋白作用的抑制效应图。

具体实施方式

本发明公开的脂肪细胞内葡萄糖转运体-1(GLUT-1)基因表达水平在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。

一、细胞培养和处理