[发明专利]一种具有抗菌抗炎活性的多肽及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种具有抗菌抗炎活性的多肽及其应用。所述多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该具有抗菌抗炎活性的多肽是以多肽Lunasin的氨基酸结构为基础进行改进而来，可在细胞中高效表达，易于分离纯化，活性较高。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种具有抗菌抗炎活性的多肽及其应用。

背景技术

抗菌多肽是生物体合成的一类小分子防御多肽，具有广谱杀菌作用，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有较强的杀灭作用，对某些真菌、支原体，尤其对耐药性细菌也都有很好的杀灭作用，是动物固有免疫系统的重要成员。一般的抗生素是通过阻断生物大分子的生物合成来发挥作用，而抗菌多肽可以在细菌细胞膜上穿孔而形成离子性通道，造成细菌细胞膜结构破坏，引起胞内水溶性物质大量渗出，最终导致细菌死亡。随着传统抗生素的广泛使用，许多病原菌已经产生耐药性，因此，活性多肽在抗菌方面就有明显优势。

现有技术中，科学工作者们已经从细菌、真菌、高等植物、无脊椎动物、脊椎动物乃至人体中发现并分离获得上千种具有抗菌活性的多肽。比如大豆生物活性多肽Lunasin是从大豆中分离鉴定的一个天然多肽，分子量约为5kDa，全长43个氨基酸残基，将此基因转染哺乳动物细胞，能阻断有丝分裂并引起染色体断裂，最终导致细胞凋亡，研究表明，Lunasin具有抗结肠癌、乳腺癌和前列腺癌的功能，还具有抗炎作用，对巨细胞具有抗氧化作用。

然而天然分离的活性多肽Lunasin存在含量低、活性较低的缺陷，不利于分离纯化，限制了其应用。

发明内容

本发明提供的一种具有抗菌抗炎活性的多肽及其应用，对现有多肽Lunasin结构进行改进，在细胞中高效表达，易于分离纯化，活性较高。

本发明的第一个目的是提供一种具有抗菌抗炎活性的多肽，所述多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二个目的是提供一种应用权利要求1所述的多肽制备的重组载体，所述重组载体是将如SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列插入质粒pET-32a(+)中得到的。

本发明的第三个目的是提供一种包含权利要求2所述的重组载体的转化体。

本发明的第四个目的是提供一种权利要求1所述的多肽在抑制LPS引起的炎症反应中的应用。

本发明的第五个目的是提供一种权利要求1所述的多肽在抗痤疮丙酸杆菌中的应用。

与现有技术相比，本发明提供的一种具有抗菌抗炎活性的多肽及其应用，具有以下有益效果：

G-Lunasin是对现有多肽Lunasin氨基酸结构进行改进，利用第32-37位GRDGRD的作用使G-Lunasin进入目的细胞核内，提高与目的细胞的结合效率，与天然Lunasin相比，促进高效表达，增加生物活性。GRDGRD后添加H氨基酸，在不影响多肽活性的基础上，增加其与亲和Ni柱的结合效率，便于分离纯化。

附图说明

图1为凝胶回收后目的基因片段和质粒片段的电泳图谱；

其中，M泳道为DNAmaker，1号泳道为目的基因片段，2号泳道为质粒片段；

图2为阳性克隆经Xba I和Pst I双酶切鉴定图谱；

其中，M泳道为DNAmaker，1号泳道为双酶切后的空质粒，2号泳道为双酶切后的重组质粒；

图3为SDS-PAGE电泳检测结果；

其中，M泳道为DNAmaker，1号泳道为G-Lunasin多肽表达产物。

具体实施方式