[发明专利]库尔勒香梨腐烂病菌毒素的制备方法

权利要求书

1.库尔勒香梨腐烂病菌毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将活化后的库尔勒香梨腐烂病菌接种到培养液中，在20-30℃下振荡培养3天以上，得培养后的菌液；所述培养液为马铃薯葡萄糖培养液、马铃薯蔗糖培养液、查氏培养液和叶片煎汁蔗糖培养液中的一种；

(2)将培养后的菌液滤去菌丝，再过滤，得滤液；将滤液离心15-21分钟，收集上清液；将上清液萃取，浓缩，得到香梨腐烂病菌毒素。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述马铃薯葡萄糖培养液的制备：将去皮马铃薯切块，加水煮沸15-30分钟，过滤，得马铃薯滤液；向马铃薯滤液中加入葡萄糖，并且加水定容，再灭菌，得马铃薯葡萄糖培养液；其中，马铃薯的质量、葡萄糖的质量与定容后的体积比为20g：2g：95-105ml；

所述马铃薯蔗糖培养液的制备：将去皮马铃薯切块，加水煮沸15-30分钟，过滤，得马铃薯滤液；向马铃薯滤液中加入蔗糖，并且加水定容，再灭菌，得马铃薯蔗糖培养液；其中，马铃薯的质量、蔗糖的质量与定容后的体积比为20g：2g：95-105ml；

所述查氏培养液中的含氮化合物、磷酸氢二钾、氯化钾、硫酸镁、硫酸亚铁、蔗糖和水的质量比为2:1:0.5:0.5:0.01:30:950-1050；

所述香梨叶片煎汁蔗糖培养液的制备：将香梨叶片加水煮沸15-30分钟，过滤，得滤液；向滤液中加入蔗糖，并且加水定容，再灭菌，得香梨叶片煎汁蔗糖培养液；其中，香梨叶片的质量、蔗糖的质量与定容后的体积比为6g：2g：95-105ml。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述查氏培养液中的含氮化合物为硝酸钠或酵母膏。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(1)中，所述培养液的pH值为6.0-8.0；

所述库尔勒香梨腐烂病菌接种后进行暗培养。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(1)中，所述培养液的pH值为7.0；

所述振荡培养为连续振荡培养；

所述培养温度为25℃。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(1)中，振荡的转速为100-140r/min。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(1)中，振荡的转速为120r/min。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(2)中，离心的转速为4500-5500r/min。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(2)中，离心的转速为5000r/min。