[发明专利]庆大霉素苯乙醛混配杀线虫剂及其制备方法

说明书

技术领域 本发明涉及一种杀线虫剂及其制备方法，具体涉及一种庆大霉素苯乙醛混配杀线虫剂及其制备方法，属于生物农药领域。

背景技术 松材线虫病（Bursaphelenchus xylophilus Nickle）是一种导致松树大量枯死的特大毁灭性传染性病害，被称为松树的“癌症”，引起了国内外普遍重视，成为检疫对象。自1982年在南京中山陵首次发现松材线虫以来，对我国森林资源特别是南方广泛种植的的松树造成了严重威胁，已扩散至14省市，致死几亿多株松树，毁林30多万hm²，损失上千亿元。具有分布广泛，蔓延快，造成经济损失严重的特点。目前福建等高发病区已经被列为疫区，为保护松树健康，应该重视松材线虫的发生和防治。

对松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）的防治在病情监测、病株监测、病株清除等防治策略上，相比化学药剂防治，更多提倡采用较为环保安全的生物防治。松材线虫生物防治主要有两个方面：一是直接对线虫进行防治，还有一种是对松材线虫的主要传播媒介昆虫松墨天牛(Monochamus alternatus)进行防治，有关松墨天牛的生物防治研究和利用的报道相对较多。对松材线虫病实行生物防治，对环境和人类友好，具有广阔的发展前景。

放线菌（Actinomycete)是一种具有丰富资源的微生物类群，是发现新型抗生素的重要资源，在生物防治中很有开发应用前景。尽管生物农药在一定时期内还不能取代化学农药，但随着化学农药弊端的出现，化学农药的使用表现出一定的局限性。随着现代生物技术的出现，尤其是基因工程技术的高度发展，为彻底改造野生型放线菌进而筛选到有活性的菌株提供了有利的工具。放线菌将成为一类有着广泛实际应用价值的微生物资源，在植物病、虫、草害的生物防治中很有开发应用前景。放线菌产生的次生代谢产物具有丰富的结构多样性，利用其次生代谢产物抗生素制备的新农药，已成为无公害农药的主体和未来农药的发展方向。目前放线菌特别是稀有放线菌小单孢菌应用于林业线虫例如松材线虫等防治上有待进一步加强研究。

在活性微生物次级代谢产物具有活性的基础上，加入稳定化学物质，改变微生物生长情况，可改变其次级代谢产物，能加强杀线杀虫等活性，混配是提高培养基效价的一种可行方法。

发明内容 本发明的目的在于提供一种庆大霉素苯乙醛混配的杀线虫剂及其制备方法。通过添加庆大霉素、苯乙醛，提高海洋放线菌(Micromonospora chalcea)的杀松材线虫活性。

本发明的一种庆大霉素苯乙醛混配的杀线虫剂的制备方法，其特征在于步骤如下：

1、制备海洋放线菌液态发酵培养基：在1000 ml的水中加入可溶性淀粉20g、酵母粉5g、K₂HPO4·3H₂O 0.58g、 NaCl 0.81g、MgSO₄· 7H₂O 0.72g、 CaCO₃ 0.28g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、10% 的苯乙醛200ul、重量比为 0.03%的无菌庆大霉素3ml，调pH 7.2-7.5；所述10% 苯乙醛，指苯乙醛与水的体积比为10%；并用0.22um的细菌过滤器灭菌；

2、发酵培养：按体积比为6%的接种量，在步骤1的培养基中接种海洋放线菌菌株EX-10-2711，培养温度32℃，转速145 rpm，发酵时间96 h，获得发酵液；

3、发酵液处理：将步骤2的发酵液，分装于无菌50ml大离心管中，离心1-3次，每次5000 rpm/min离心10min，分离获得上清和沉淀。a) 上清，4℃保存备用；b) 沉淀，用无菌水洗涤3次后，将离心洗涤后的细胞团与3倍体积的无菌1% NaCl溶液混匀，于560W和工作时间/间隔时间是5s的条件下在超声波破碎仪中冰浴破碎5min，破碎后5000rpm 离心10min去沉淀，取上清液，4℃保存备用；所述1% NaCl溶液，为NaCl与水的重量比为1%的 NaCl溶液；

4、制备杀线虫剂：合并步骤3两次获得的上清液，即为庆大霉素苯乙醛混配的杀线虫剂。

本发明使用的海洋放线菌菌株EX-10-2711及各种化学原料均由市场购得。