[发明专利]检测黄杉大小蠹的引物、试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201710448505.8 | 申请日： | 2017-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN107164500B | 公开（公告）日： | 2020-06-26 |
| 发明（设计）人： | 石娟;邬颖;陈芳;王子楠;李建光 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王莹;吴欢燕 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 大小 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测黄杉大小蠹的引物，其特征在于，包括：
正向引物：5’-AGCCCCAAGGATAGATGA-3’；
反向引物：5’-AGGAATCCCAGGAAGACT-3’；
还包括一对通用引物：
LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；
HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。
2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括Taq酶、PCR Buffer和dNTP Mixture。
4.一种检测黄杉大小蠹的方法，其特征在于，包括：
（1）提取样品DNA；
（2）以步骤（1）提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的正向引物和反向引物进行PCR扩增反应；
（3）分析PCR产物；
其中，步骤（2）具体为：
（21）以步骤（1）提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的通用引物进行第一轮PCR扩增，扩增目的条带为650-750bp；
（22）以第一轮PCR扩增产物按1:50~100稀释后的产物为模板，利用权利要求1所述的正向引物和反向引物进行第二轮PCR扩增。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（21）中，PCR反应体系为：以25μL计，0.125μLTaq酶、2.5μL10×PCR Buffer、2.5μL dNTP Mixture、1μL DNA、1μL 引物LCO1490、1μL引物HCO2198和17.375μL灭菌去离子水。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤（22）中，PCR反应体系为：以25μL计，0.125μLTaq酶、2.5μL10×PCR Buffer、2μL dNTP Mixture、1μL DNA、1μL 正向引物、1μL反向引物和17.375μL 灭菌去离子水。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（22）中PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，50℃复性30s，72℃延伸1.5min， 35个循环；72℃延伸5min。
8.权利要求4-7任一项所述的方法在植物保护中的应用。
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