[发明专利]硫酸软骨素用于扩增CIK细胞、制备CIK细胞扩增试剂和包被培养器皿的用途

说明书

本发明公开了硫酸软骨素用于扩增CIK细胞、制备CIK细胞扩增试剂和包被培养器皿的用途，该高分子量硫酸软骨素由动物胸软骨来源的硫酸软骨素经酸降解制备而得，高分子量指分子量范围为14.2‑15.6kD。本发明提供的高分子量硫酸软骨素可以显著提高CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性，可以用于制备商品化的CIK细胞培养基和培养器皿。

技术领域

本发明属于细胞免疫领域，涉及CIK细胞，具体涉及硫酸软骨素用于扩增CIK细胞、制备CIK细胞扩增试剂和包被培养器皿的用途。

背景技术

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)广泛存在于各种动物组织中，尤其在软骨和结缔组织中含量丰富。由于不同生物或者相同生物的不同组织所含CS的种类和量均不同，使其结构与活性复杂多样。作为一类重要的生物大分子，CS具有广泛的生物活性，作为安全有效的保健食品和药品在世界各国得到了广泛应用。大量研究表明，CS具有降血脂、抗动脉粥样硬化和抗病毒性肝炎等活性，临床中已用于防治关节炎、肾炎、神经痛、偏头痛等。

CS属于糖胺聚糖类(Glycosaminoglycans，GAGs)物质，以蛋白聚糖的形式广泛分布于动物的软骨、皮肤、玻璃体及血管等组织中，在软骨组织中尤其丰富，是软骨的重要组成成分。CS是一类含有聚阴离子的线性多糖，由D-葡糖醛酸(GlcA)和N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)构成的二糖单位以[4)-β-GlcA-(13)-β-GalNAc-(1]的序列重复连接组成骨架结构，并在后续的生物合成过程中在不同的位置引入硫酸基。不同来源及提取方法得到的CS其硫酸化的位点和程度、相对分子质量(Mr)均存在差异，而这是影响CS生物活性的关键因素。

生物治疗是继手术、化疗及放疗3种传统模式之后的第4大肿瘤治疗模式，前3种模式或毒副作用较大，或不能清除体内残存肿瘤细胞，大部分肿瘤患者终因复发或难治而导致死亡。细胞免疫治疗技术在肿瘤的生物治疗中占有重要地位,显示出良好的应用前景，并逐渐成为肿瘤治疗的重要手段之一。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killercell，CIK)是近年来发现的一种非常有前景的过继免疫细胞，具有增殖迅速、杀瘤活性广谱且高效、毒副作用微小等优点，已经成为肿瘤生物免疫治疗的主力军。CIK细胞的主要效应细胞为CD3+CD56+表型T淋巴细胞，兼有NK细胞和T细胞的特征。在功能上，CIK一方面拥有T淋巴细胞强大抗肿瘤活性，另一方面拥有NK细胞非MHC限制性的杀伤肿瘤的特点，其增殖迅速、对正常造血影响轻微。CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性直接关系到治疗成本和效果。

目前尚未见硫酸软骨素在CIK细胞培养扩增方面的应用。

发明内容

本发明旨在提供硫酸软骨素用于扩增CIK细胞、制备CIK细胞扩增试剂和包被培养器皿的用途，以提高CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性，降低细胞治疗成本并提升治疗效果。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种高分子量硫酸软骨素，由动物胸软骨来源的硫酸软骨素经酸降解制备而得，所述高分子量指分子量范围为14.2-15.6kD。

优选地，所述酸为苹果酸。

优选地，所述酸降解的方法包括如下步骤：配制质量体积浓度为2-4％的硫酸软骨素溶液，加入苹果酸至浓度为0.1-0.3mol/L，于60-80℃搅拌降解8-12h，用足量的碱性物质终止反应，并调节pH至6.5，加入乙醇沉淀，分离干燥即得所述的高分子量硫酸软骨素。

优选地，所述碱性物质为碳酸钙。

优选地，所述动物胸软骨指鸡胸软骨。