[发明专利]一种针对天门冬属雌雄异株植物性别的分子生物学鉴别方法及其应用

权利要求书

1.一种针对天门冬属雌雄异株植物性别的分子生物学鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取待测的天门冬属雌雄异株植物材料，提取单株总DNA；

2)以其为模板、利用分子标记的引物执行PCR扩增；

3)对扩增产物进行凝胶电泳检测；

4)观察电泳结果中是否存在上述分子标记的特征条带；

其中，所述天门冬属雌雄异株植物是芦笋、兴安天门冬、长花天门冬或A.maritumus；

所述分子标记位于芦笋雌性抑制基因SOFF基因的编码区；

其中，所述分子标记的引物其核苷酸序列选自以下四组之一：

第一组：

正向引物F：5’-AAACACAGGGCGCTACTGAA-3’；

反向引物R：5’-TGTGCGAGTATCCTCCTTGC-3’；

此时所述特征条带的核苷酸序列如Seq ID No.9所示；

第二组：

正向引物F：5’-GCGGGCGTAATTTTCCAGTG-3’；

反向引物R：5’-GACTTGGGCACAGAAGCAAC-3’；

此时所述特征条带核苷酸序列如Seq ID No.10所示；

第三组：

正向引物F：5’-TATCAGGTCGGGGGTAAGCA-3’；

反向引物R：5’-TGACTTGGGCACAGAAGCAA-3’；

此时所述特征条带核苷酸序列如Seq ID No.11所示；

第四组：

正向引物F：5’-AAGGGTATTATCAGGTCG-3’；

反向引物R：5’-CCAAGTTGAGTTCAGGGT-3’；

此时所述特征条带核苷酸序列如Seq ID No.12所示。

2.根据权利要求1所述的一种针对天门冬属雌雄异株植物性别的分子生物学鉴别方法，其特征在于步骤2)所述PCR扩增，满足以下条件：

每25μL的PCR反应体系包括：10×buffer 2.5μL，浓度为25mmol/L的MgC1₂溶液2.5μL，浓度为1mmol/L的dNTPs溶液2.5μL，浓度为5pmol/L的引物2μL，浓度为1.25～20ng/μL的模板DNA 2μL，浓度为1U/μL的Taq DNA聚合酶1μL，ddH₂O余量；

PCR扩增反应程序为：

A)94℃预变性30s；

B)94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸40s；

C)72℃延伸5min；

其中步骤B)执行32个循环后在执行步骤C)。

3.根据权利要求1所述的一种针对天门冬属雌雄异株植物性别的分子生物学鉴别方法，其特征在于步骤3)具体包括以下操作：取步骤2)所得的扩增产物在2％g/mL琼脂糖凝胶中以200V电压电泳30min，而后利用凝胶成像系统观察、拍照。

4.应用权利要求1所述方法进行芦笋单一性别栽培的方法，其特征在于包括以下步骤：种植芦笋，至得到若干幼苗；利用权利要求1所述方法从若干幼苗中选取单一性别的芦笋幼苗，即得到若干目的幼苗；仅选取所述若干目的幼苗进行全雄或全雌栽培。