[发明专利]重组单纯疱疹病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组单纯疱疹病毒，其特征在于，所述重组单纯疱疹病毒包括载体和编码至少两种细胞因子的外源基因，所述载体为缺失编码ICP34.5和ICP47的基因、以及可选择的缺失编码ICP6、TK和UNG的基因中的至少一种的单纯疱疹病毒，所述外源基因的插入位点为所述载体上缺失编码ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一处。

2.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述载体为缺失编码ICP34.5和ICP47的基因、以及可选择的缺失编码ICP6的基因的单纯疱疹病毒，所述外源基因的插入位点为所述载体上缺失编码ICP34.5和/或ICP47的基因的位置。

3.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述细胞因子为白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、生长因子和趋化因子中的至少两种，优选为GM-CSF、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、TNF-α、IFN-γ、IFN-α和IFN-β中的至少两种，更优选为GM-CSF、IL-2和IL-12中的至少两种。

4.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述外源基因还包括启动子、起始密码子和终止密码子，以及可选的连接序列。

5.根据权利要求3所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述启动子选自CMV启动子、EF1α启动子、SV40启动子、RSV启动子和MMTV启动子中的至少一种，优选为CMV启动子和/或EF1α启动子。

6.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述单纯疱疹病毒为I型单纯疱疹病毒。

7.一种制备权利要求1-6中任意一项所述的单纯疱疹病毒的方法，其特征在于，该方法包括：将单纯疱疹病毒中编码ICP34.5和ICP47的基因敲除、以及可选择地敲除编码ICP6、TK和UNG的基因中的至少一种，并插入编码至少两种细胞因子的外源基因，其中，所述外源基因的插入位点为所述载体上敲除编码ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一处。

8.权利要求1-6中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒和/或由权利要求7所述的方法制备得到的重组单纯疱疹病毒在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述癌症为黑色素细胞瘤、脑胶质瘤、头颈部肿瘤、肝癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌中的至少一种。