[发明专利]一株柯萨奇B组5型病毒及其用于制备感染性动物模型及试剂盒的用途

说明书

【技术领域】

本发明涉及病毒学。特别地，本发明涉及一株能感染乳鼠的柯萨奇B组5型病毒，以及该病毒的用途。

【背景技术】

柯萨奇病毒B组5型(Coxsackievirus B5,CV-B5)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)，肠道病毒属(Enterovirus)。CV-B5是无菌性脑膜炎的主要病原体之一。CV-B5感染除可引起上呼吸道感染、腹泻以及手足口病等，主要引起病毒性脑炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎、弛缓性麻痹、扩张性心肌炎以及糖尿病等多种重症疾病。此外，根据文献报道，CV-B5感染可引起短暂性失语症和小儿急性横贯型脊髓炎等罕见临床症状。近年来在我国HFMD病例中检出较高比率的CV-B5感染，但相关基础研究较少。

动物模型是研究病毒在体内的入侵、复制、传导、致病、转归等机理以及评价疫苗预防效果和药物疗效等的重要工具。理想的动物模型对于致病机理、药物治疗效果以及疫苗相关研究均具有重要意义。有学者采用猪、C3H/HeJ小鼠和BALB/c小鼠开展了CV-B5的动物模型相关研究，但目前国内外尚无系统的、与人体临床症状相近的CV-B5动物模型成功构建的报道，严重制约了相关基础研究的开展。

《柯萨奇B5病毒感染心肌细胞微量模型的建立》(沈茜等人，第二军医大学学报1989年第10卷低3期)公开了柯萨奇B5病毒感染的波动乳鼠心肌细胞微量模型，获得了体外心肌细胞病变效果，然而并没有涉及动物模型。

《柯萨奇病毒B组5型的研究进展》(郝晓甜等人，中国生物制品学杂志2017年4月第30卷第4期)提及现有的CV-B5毒株感染小鼠可引起胰腺炎，或引起间质性肺炎和心肌炎。

由此可见，尽管CV-B5病毒是无菌性脑膜炎的主要病原体之一，然而目前尚未能够建立有效获得脑部病变或脊髓神经病变的动物模型。

【发明内容】

本发明的目的是克服现有技术缺陷，提供一株能够有效感染乳鼠并获得脑部病变及脊髓神经病变的柯萨奇B组5型病毒毒株，并提供该毒株在制备动物模型中的用途。

为了实现上述目的，本发明提供一株能稳定复制和传代的柯萨奇B组5型病毒(Coxsackievirus B Group 5type)CVB5/JS417，所述病毒于2017年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.13851；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

具体地，以2013年收集的江苏地区手足口病例临床样本为研究对象，经VERO细胞分离、纯化获得一株可稳定复制的病毒株，命名为CVB5/JS417。所得毒株经全基因序列扩增后基因序列比对证实为CV-B5病毒，基因全长为7370bp。经外源因子检测，证实该病毒株无其他外源因子污染。经生物学特性分析，该病毒株病毒滴度为8.50LgCCID50/ml。

本发明还提供上述柯萨奇B组5型病毒CVB5/JS417在制备柯萨奇病毒B组5型感染小鼠中的用途。

分别采用相同剂量的CVB5/JS417病毒，腹腔攻击1～3日龄的BALB/c、C57、NIH、ICR和昆明鼠，结果实验动物在攻击后3天先后出现后肢麻痹、萎靡甚至死亡，其中BALB/c、C57鼠均在攻击后21天内可导致70％～100％实验动物致死。

采用相同剂量CVB5/JS417病毒株分别腹腔攻击新生1、3、5、7、14日龄的BALB/c小鼠。CVB5/JS417可使新生1～3日龄小鼠全部出现发病和死亡。

在感染方式方法，采用相同剂量的CVB5/JS417病毒株，分别通过颅内、腹腔、口服方式感染3日龄BALB/c乳鼠。三种感染方式的动物死亡率均为100％。

在感染剂量方面，分别采用0.50-7.50LgCCID50/只的CVB5/JS417腹腔攻击3日龄BALB/c小鼠。其中，3.50～7.50LgCCID50/只剂量组均可使实验动物出现100％发病和死亡。

由此可见，以CVB5/JS417病毒株腹腔方式攻击3日龄BALB/c小鼠能够建立CV-B5小鼠动物模型。该模型可导致实验动物出现精神萎靡、脱毛、颤抖、弓背、后肢麻痹和拖腿等症状，并最终导致100％的受攻击小鼠死亡。且该实验具有良好的重复性。