[发明专利]一种基于二甲基化标记DIA策略的蛋白质定量方法有效
| 申请号： | 201710455026.9 | 申请日： | 2017-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN109142737B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;刘健慧;单亦初;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 甲基化 标记 dia 策略 蛋白质 定量 方法 | ||
1.一种基于二甲基化标记数据非依赖DIA策略的蛋白质定量方法，其特征在于：蛋白质样品经过变性、还原、烷基化后酶解，利用二甲基化反应标记肽段样品，通过二甲基化反应标记试剂甲醛、氰基硼氢化钠及其相应同位素的组合分别标记肽段样品，标记试剂组合方式分别为：1-plex：CH2O+NaBH3CN；2-plex：CH2O+NaBD3CN；3-plex：13CH2O+NaBD3CN；4-plex：13CD2O+NaBH3CN；5-plex：13CD2O+NaBD3CN，进而实现2-5个肽段样品的多重标记；混合标记肽段样品使其在DIA模式中成组出现，提取每重标记相应的DIA数据中多条母离子和子离子的提取离子色谱图，利用提取到的峰面积进行蛋白质的多重定量分析。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：DIA模式包括 SWATH、可变窗口SWATH、MSX-DIA或MSE。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：用于谱峰提取的离子包括母离子、特征碎片离子a, b, y, c, z, x离子，提取1条以上碎片离子的提取离子色谱图峰面积用于进行蛋白质的多重定量分析。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：定量方法适用于2-5个样本的相对定量分析，也适用于基于内标物的高通量绝对定量分析。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法所用蛋白酶适用于包括胰蛋白酶、Lys-C酶、Lys-N酶、Glu-C酶、Arg-C酶、Asp-N酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、蛋白酶K的多种酶切位点的蛋白酶中的一种或两种以上。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法兼容DIA样品前处理过程中进行的分级，适用于蛋白质组学中的二维分离策略。
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